Kinesin Motility Assay Using Optical Tweezers

来源 :中国化学会第三届全国生物物理化学会议暨国际华人生物物理化学发展论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wucaixia303
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Kinesin family plays some important roles within a cell society.We used optical tweezers to investigate kinesins include Kinesin-1(K560) and Kinesin-7(CENPE).Based on a DIC microscope,the optical trap have a non-symmetrical stiffness distribution.Through coordinate rotation of detected signals,we can measure movements dependent on external force for motor protein moving along microtubule with arbitrary orientation.The measurements of K560 were in accord with reported results in single molecule chareristics.However,CENPE moved along microtubule slowly.Under inhibition of SUK4,its movements appeared stuck state.Occasionally,the stuck situation can be broken,then,the protein moved on.When increasing the molecule binding concentration,two or more molecules of CENPE moved slower than single molecule.Meanwhile,the elasticity of CENPE had been measured by detecting velocity of trapped beads relative to fixed beads when piezo-stage moving.The single molecule chareristics of CENPE are vital to chromosomes moving to metaphase plate and subsequent oscilllation.
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