【摘 要】
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目的：用抗HIV-1p24单克隆抗体和多克隆抗体构建间接ELISA检测试剂,检测献血员、HIV-1抗体阳性及其他病种样品,探讨其应用的可行性,从而为试剂盒的研制奠定基础,同时为HIV的早期诊断、预后判断及评价抗病毒的治疗效果方面提供重要的诊断依据.方法:根据Triques,K报道的HIV-1全基因序列中的gag基因序列扩增p24抗原全序列,将其插入pRSET表达载体进行表达,利用固定化金属粒子(N
【机 构】
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解放军第302医院传染病研究所病毒研究室,100039
【出 处】
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第二届全国现代免疫诊断技术学术研讨会
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目的：用抗HIV-1p24单克隆抗体和多克隆抗体构建间接ELISA检测试剂,检测献血员、HIV-1抗体阳性及其他病种样品,探讨其应用的可行性,从而为试剂盒的研制奠定基础,同时为HIV的早期诊断、预后判断及评价抗病毒的治疗效果方面提供重要的诊断依据.
方法:根据Triques,K报道的HIV-1全基因序列中的gag基因序列扩增p24抗原全序列,将其插入pRSET表达载体进行表达,利用固定化金属粒子(Ni2+)配体亲和层析技术(IMAC)纯化p24抗原后,制备抗HIVP24单克隆抗体及多克隆抗体,将抗HIV-1p24单克隆抗体经33﹪的饱和硫酸氨沉淀后包板作为固相,辣根过氧化物酶标记经DEAE52纯化的兔抗HIV-1p24抗体作为酶标记物,建立检测HIVP24抗原的双抗体夹心ELISA方法.
结果:该方法具有较高的敏感性和特异性,检测HIV-1p24标准抗原的检出灵敏度为100pg/ml,检测87份HIV抗体阳性血清中1份HIV-1p24抗原阳性;检测195份健康献血员和131份其他病种病人血清(其中HAV39份;HCV40份;HBV36份;麻疹9份;流行腮腺炎5份;风疹2份),特异性为99.39﹪(324/326),2份弱阳性血清均为HCV抗体阳性.
结论:该方法具有较高的灵敏度和特异性,且操作简便,结合特异性抗体检测有助于缩短HIV感染诊断的窗口期.
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