【摘 要】
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为构建携TRAIL和HN基因的重组腺病毒载体,采用RT-PCR分别扩增出TRAIL和HN基因,建立TRAIL-2A-HN连接,将目的基因克隆到pShuttle-CMV穿梭载体中,与pAdeasy-1载体在BJ5183细菌内同源重组,构建pAd-TRAIL和pAd-TRAIL-2A-HN,将质粒转染AD293细胞,包装后的重组腺病毒,经RT-PCR检测、荧光显微镜观察,并测定所获得重组病毒的滴度.结
【机 构】
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福建出入境检验检疫局技术中心,福建福州350001 天津农学院动物科学系,天津300384
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家禽学分会第十八次全国家禽学术讨论会
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为构建携TRAIL和HN基因的重组腺病毒载体,采用RT-PCR分别扩增出TRAIL和HN基因,建立TRAIL-2A-HN连接,将目的基因克隆到pShuttle-CMV穿梭载体中,与pAdeasy-1载体在BJ5183细菌内同源重组,构建pAd-TRAIL和pAd-TRAIL-2A-HN,将质粒转染AD293细胞,包装后的重组腺病毒,经RT-PCR检测、荧光显微镜观察,并测定所获得重组病毒的滴度.结果:RT-PCR、荧光显微镜检测证实重组腺病毒质粒成功导入AD293细胞中且具有良好的感染性,病毒滴度达到108TCID50/mL.结论:成功构建了重组腺病毒载体系统,为下一步研究其对马立克氏病肿瘤细胞的抑制作用建立基础.
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