【摘 要】
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探讨不同浓度地塞米松对机械损伤脊髓神经元自噬与凋亡的影响.方法： (1)原代培养胎鼠脊髓神经元,NSE和TUBB3、DAPI免疫荧光双标鉴定； (2)实验分组(正常组、损伤对照组、Dex10-7M、Dex10-6M、 Dex10-5M)建立神经元机械损伤模型并于损伤后立即给予不同干预因素处理24h； (3)MTT、WB、QPCR、流式、AO、电镜等； 结果： ⑴脊髓神经元生长状态良好；脊髓神经元鉴
【机 构】
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德化县医院 福建医科大学附属协和医院
【出 处】
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中华医学会第十八届骨科学术会议暨第十一届COA国际学术大会
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探讨不同浓度地塞米松对机械损伤脊髓神经元自噬与凋亡的影响.方法： (1)原代培养胎鼠脊髓神经元,NSE和TUBB3、DAPI免疫荧光双标鉴定； (2)实验分组(正常组、损伤对照组、Dex10-7M、Dex10-6M、 Dex10-5M)建立神经元机械损伤模型并于损伤后立即给予不同干预因素处理24h； (3)MTT、WB、QPCR、流式、AO、电镜等； 结果： ⑴脊髓神经元生长状态良好；脊髓神经元鉴定：NSE、TUBB3、DAPI三者均阳性所占比例高； ⑵MTT：损伤各组与正常组相比细胞活力明显下降,10-7M激素组细胞活力较损伤对照组有所增高,但无统计学差异(P＞0.05)；10-6M激素组细胞活力较损伤对照组明显增高,而10-5M激素组细胞的活力却明显下降(P＜0.05)； ⑶ WB：正常组LC3Ⅱ与Beclin1明显低于损伤各组；随地塞米松浓度的增高LC3Ⅱ逐渐降低(P＜0.05)；正常组的Caspase-3表达水平明显低于损伤各组,10-5、10-6M激素组的Caspase-3表达水平明显低于损伤对照组(P＜0.05),10-6M激素组Caspase-3表达水平最低,10-5M激素组较10-6M激素组Caspase-3表达水平有所升高但无明显差异(P＞0.05)； ⑷ QPCR： 正常组LC3Ⅱ与Beclin1的mRNA水平明显低于损伤各组,随地塞米松浓度的增高自噬水平逐渐降低呈浓度依赖性(P＜0.05)；10-5、10-6M激素组Caspase-3的mRNA水平明显低于损伤对照组(P＜0.05),10-6M激素组Caspase-3的mRNA水平最低,10-5M激素组较10-6M激素组Caspase-3 mRNA水平升高但无明显差异(P＞0.05)； ⑸流式细胞术：损伤各组凋亡水平明显高于正常组,10-5、10-6M激素组的凋亡水平明显低于损伤对照组(P＜0.05),10-6M激素组凋亡水平最低,10-5M激素组较10-6M激素组凋亡水平升高但无明显差异(P＞0.05)； ⑹AO：正常组的细胞内红绿荧光强度比明显低于损伤各组；随激素浓度增高红绿荧光强度比呈递减趋势； ⑺透射电镜：正常组细胞内很少看到自噬体及凋亡小体,损伤各组皆可观察到明显的双层膜自噬体及凋亡小体结构；随着激素浓度的增高,自噬体、凋亡小体数量呈减少趋势；10-5M激素组凋亡小体较10-6M激素组有所增多.结论： ⑴机械损伤后,脊髓神经元自噬及凋亡水平呈不同程度上升； ⑵地塞米松抑制受损神经细胞自噬,自噬水平与激素呈浓度依赖性,随着激素浓度增高抑制作用也趋明显； ⑶大剂量地塞米松保护受损脊髓神经元通过抑制脊髓神经元凋亡；然而激素浓度过高,减弱对细胞的保护作用；低浓度激素对细胞的保护作用不明显； ⑷大剂量地塞米松减少受损脊髓神经元凋亡可能是通过抑制脊髓神经元自噬.
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