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以纯化的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)重组S蛋白免疫BALB/c小鼠，通过细胞融合技术，间接ELISA方法进行筛选和有限稀释法3次克隆，获得3株稳定分泌抗TGEV S蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株，分剐为1G6、2F8和3E5。检测细胞培养上清效价分别为1∶3200，1∶6400，1∶6400，诱导腹水抗体效价分别为1∶1600,1∶3200，1∶3200。腹水中的蛋白含量分别为50.1341mg/mL,48-3649mg/mL，59.3740mg/mL。3株杂交瘤细胞上清与猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CFSV)均无交叉反应;Westernblotting结果表明所获的3株单抗均与天然的TGEV S蛋白发生反应，且纯度很高.用所制单抗建立了单抗介导的双夹心间接ELISA方法检测TGEV S蛋白，该方法具有良好的特异性。