表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其鉴定

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猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种高度传染性疾病。主要表现为妊娠母猪发生早产、流产、死胎、弱仔和木乃伊胎等,该病原体是心肌炎病毒属的成员。疫苗接种是控制该病发生的一个有效办法,但目前现有疫苗存在许多不足,因为灭活的病毒粒子不能诱发中和抗体,因此不能阻止病毒感染和发病等。弱毒疫苗虽然可以形成有效的临床保护,但也不能阻止野毒感染,且存在着散毒和毒力返强之忧,研制安全有效的新型疫苗是PRRS研究领域的一个热点。伪狂犬(PRV)是由伪狂犬病毒引起猪神经损伤,导致死亡率非常高,对养猪业的危害很大,目前以PRV弱毒疫苗免疫的效果很好。作为一种疱疹病毒,拥有庞大的基因组和许多非必需区,具有表达外源基因的巨大潜力,被认为是理想的活疫苗载体。以伪狂犬病毒作为活疫苗载体表达外源基因是当前兽用疫苗领域的研究热点。在本研究中,将CMV启动子控制下的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1a株GP5基因和SV40启动子控制下的LacZ基因表达盒插入到我们以前构建的通用伪狂犬病病毒(PRV)转移载体pBdTK-Uni中,同时在右侧同源臂下游插入一个1.7kb的KpnI片段构建了转移载体pGP5-LacZ。将该载体与PRV Bartha-K61株基因组DNA通过脂质体法共转染Vero细胞,经过10代蓝斑筛选纯化和PCR鉴定获得了一株表达PRRSV GP5的重组伪狂犬病病毒,命名为rPRV-GP5.经Western blotting和间接免疫荧光试验证实PRRSV GP5在重组病毒中获得了表达,重组病毒的生长特性和表达蛋白的抗原性与亲本病毒相似。为了检测该重组病毒的免疫原性和安全性,选区5-6月龄的绵羊10头,分为三组,对于前两组分别免疫106PFU(4头)和107PFU(3头)的重组病毒,第三组作为非免疫对照(3头),在免疫后的40天用103LD50高致病力S株伪狂犬病毒攻击,结果表明所有免疫羊全部获得保护,结果提示重组病毒可望作为猪繁殖与呼吸综合征的活载体疫苗进一步开发。
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