目的 :获得U87来源的肿瘤干细胞,并分析其B7家族负性共刺激分子的表达情况。方法 :有限稀释法筛选出细胞形态发生明显变化的非CD133依赖的肿瘤干细胞,通过添加b FGF、EGF、b-27的DMEM/F12干性培养基培养,形成悬浮生长的细胞球。RT-PCR检测其干性分子CD133(1)、CD133(2)、NESTIN、SOX2的表达情况。聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染观察U87来源肿瘤干细胞和普通U87细胞的蛋白表达差异。流式细胞术和定量PCR方法分析了其表面B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5和B7-H6等B7分子及趋化因子CXCR4的表达情况。结果在有限稀释分离单个细胞培养后,发现呈非典型生长的细胞,细胞凸起变短,梭形的长径变短。将培养基换成DMEM/F12的干性培养基后,细胞形成悬浮生长的细胞球,表现出典型的神经干细胞生长特点。U87来源的肿瘤干细胞相比U87本身在m RNA水平表达较低的CD133(1),较高水平的CD133(2),NSETIN和SOX2的表达分别上调了15倍和50倍。电泳结果显示U87来源的肿瘤干细胞的蛋白表达组成也发生明显的变化。流式及定量PCR分析表明,U87来源的肿瘤干细胞和U87细胞不同程度表达B7家族分子和CXCR4分子,两者相比,B7-H1和CXCR4在干细胞中表达显著提高;B7-H3和B7-H6在两者表面表达都很高,在干细胞表面表达有些许提高;B7-H4膜上不表达,胞间有较高的表达,两者没有区别。结论 :分离并鉴定了非CD-133依赖的U87来源的肿瘤干细胞,该细胞在m RNA水平高表达干性分子,表现出CD133(1)的下调和CD133(2)的上调。在该细胞上B7-H1和CXCR4表达提高,并高表达B7-H3和B7-H6,提示这些分子在胶质瘤的发生发展起重要调控作用,而具体机制还有待进一步的研究。