【摘 要】
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目的：研究干扰Chk1／2基因的表达对脑胶质瘤细胞放疗抵抗性的影响，为胶质瘤的治疗提供新的途径。方法：根据GenBank数据提供的Chk1及Chk2基因核苷酸序列，各选择设计一条适合转录短发夹RNA(Small hairpin RNA，shRNA)的DNA序列，与pLK0.1质粒载体链接，转化感受态大肠杆菌．挑取单克隆，提取质粒，使用限制性内切酶EcoRI及NcoI酶切，琼脂糖凝胶电泳，DNA序列
【出 处】
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2011金陵神经肿瘤国际论坛暨2011中国胶质肿瘤协作组学术研讨会
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目的：研究干扰Chk1／2基因的表达对脑胶质瘤细胞放疗抵抗性的影响，为胶质瘤的治疗提供新的途径。方法：根据GenBank数据提供的Chk1及Chk2基因核苷酸序列，各选择设计一条适合转录短发夹RNA(Small hairpin RNA，shRNA)的DNA序列，与pLK0.1质粒载体链接，转化感受态大肠杆菌．挑取单克隆，提取质粒，使用限制性内切酶EcoRI及NcoI酶切，琼脂糖凝胶电泳，DNA序列鉴定。通过慢病毒转染胶质瘤细胞系U87进行传代扩增。用RT-PCR和Western blot方法分别在mRNA和蛋白水平上测定Chk1及Chk2的表达。将转染的U87胶质瘤细胞系经X照射后，对细胞进行细胞周期和凋亡的检测。结果：重组质粒成功转化感受态大肠杆菌，经EcoRI及NcoI酶切后琼脂糖凝胶电泳结果，表明寡核苷酸成功插入计划位点，测序鉴定正确，包装慢病毒后转染U87细胞，Rea-time PCR检测Chk1和Chk2的干扰效应，分别为73.74％和85.12％。细胞周期检测提示放疗组和放疗干扰Chk2组的细胞人部分阻滞在G2／M期；干扰Chk1组细胞放疗后的凋亡率较对照组和干扰Chk2组细胞高。结论：慢病毒转染细胞可以有效的将干扰Chk1和干扰Chk2基因带到U87细胞并发挥作用，干扰Chk1和Chk2可以增加放疗对U87细胞的敏感性，为胶质瘤的治疗提供新的治疗途径。
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胶质瘤(glioma)是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤，在成人其发生率约占颅内肿瘤的一半。尽管手术、放射治疗及化学治疗等治疗手段现在已取得不少的进步。但对恶性胶质瘤的治疗效果仍然不佳。pygopus基因是近年新发现的wnt信号系统中重要功能蛋白。Pygopus在哺乳动物含有两个同源结构体，即Pygol和pygo2。已有的研究结果表明pygo2与wnt信号及多种恶性肿瘤发生密切相关，目前该基因与脑胶质
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