四环素核酸适配体电化学生物传感器的研制

来源 :2013年霉菌毒素与饲料安全饲料毒理学术报告会暨饲料毒理学专业委员会第五届全国代表大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:l1076223769
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  四环素(tetracyclines,TCs)是一类含有骈四苯结构的广谱抗菌药物,价格低廉,可直接作为一种饲料添加剂投放到饲料中,目前被广泛的应用于养殖业、畜禽业、水生生物等领域.在欧盟,四环素类抗生素的使用量占了整个禽畜业中抗生素使用量的65%.在包括美国在内的一些国家和地区,四环素还被大量用作生长促进剂投喂给动物,在药品市场中占有重要地位.四环素的过度使用造成它们在动物性食品中超标残留,成为目前动物性食品安全中的突出问题.我国和欧盟明确规定:牛奶和肌肉组织中TCs总含量不得超过100μg/kg,鸡蛋中为200μg/kg;美国食品药品监督管理局规定TCs在动物肌肉组织中总量为2μg/g,牛奶中为300 ng/g.因此,四环素的简便、快速检测方法是食品安全控制中十分重要的技术.本研究利用等温滴定量热法筛选到的四环素核酸适配体做识别分子制作生物传感器,将适配体与四环素的结合作用转变为可检测的电信号,用交流阻抗法对四环素进行定量检测,并用原子力显微镜对适配体与四环素在电极界面的结合作用进行表征.结果:利用等温滴定量热法从13bp长度的单链DNA随机序列库中筛选到一条对四环素有高亲和力的适配体(Kd=5.18×10-5 M),以此适配体作为识别元件成功的构建了四环素适配体电化学生物传感器.交流阻抗分析,在5.0ng/mL-5.0×103ng/mL 浓度范围内,电子转移阻抗的差值△Ret与四环素浓度的对数呈现良好的线性关系,相关系数R2 = 0.9879,检测限为1.0 ng/mL,反应时间为15min.该检测限明显低于目前国家限定的四环素残留量(6.0×102ng/mL),也低于目前其他报道的四环素适配体传感器的检测限.不同批次组装的电极的组装率Q的RSD为4.6%,平均组装率为82.4%,说明该传感电极具有良好的制作重现性.该传感电极在4℃存储15天后检测,信号变化8.5%,表明该生物传感器具有良好的存储稳定性.
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