【目的】鸡球虫病是养鸡生产中最常见、危害最大的一种流行性寄生虫病,由于普通的消毒方法难以彻底消灭环境中的球虫,因此球虫存在于任何养鸡的地方。恩诺沙星是养鸡生产中常用的广谱抗菌药,在养鸡实际生产中恩诺沙星和球虫感染会同时出现在鸡肠道内。本研究旨在通过建立人工感染鸡球虫病模型,采用不同剂量恩诺沙星处理后探讨球虫感染应激条件下鸡肠道大肠杆菌对恩诺沙星的耐药变化规律。【方法】本实验选用20只16日龄SPF健康雏鸡人工感染柔嫩艾美尔球虫,疾病模型构建成功后,将雏鸡随机分为一个空白对照组和三个给药组。雏鸡20日龄时开始经口灌服高剂量(100mg/kg)、中剂量(PK-PD剂量,4mg/kg)、低剂量(亚治疗剂量,0.1mg/kg)和0mg/kg恩诺沙星。给药周期为两轮,每轮给药7天,停药7天。分别在给药后第1d、4、7d,停药后第1、4、7d通过鸡肛门拭子采集新鲜粪便,重悬于无菌生理盐水后涂布在含恩诺沙星0mg/L、0.25 mg/L、0.5 mg/L和2mg/L麦康凯琼脂平板上,37℃恒温培养12h,记数平极克隆数(CFUs)。在计数平极上挑取单菌落,于伊红美蓝固体培养基上纯化后,挑取单菌落通过琼脂稀释法测定恩诺沙星对鸡肠道大肠杆菌的MIC。提取基因组DNA,PCR扩增耐药基因gyrA、gyrB、parC、parE、qnrA、qnrB、qnrS、aac6Ibcr、oqxAB、qepA并测序。【结果】低剂量给药组一直未出现敏感性下降的大肠杆菌;中剂量给药组在第二次给药期间出现耐药大肠杆菌,在停药后耐药菌数量又逐渐下降;高剂量给药组在第二次给药期间出现耐药大肠杆菌,停药后数量虽然有所下降但仍保持较高水平。在筛选出的570株鸡源肠道大肠杆菌中耐药菌株203株,低敏感菌株69株,敏感菌株298株。这些耐药菌株主要来自4mg/kg剂量组和100mg/kg剂量组,且都发生了gyrA的D87G突变,但gyrB、parE基因未发生突变。在gyrA双突变的情况下,只有MIC为16μg/mL的菌株中检测到了parC突变E84K,说明parC的突变E84K可以引起更高水平的耐药。而在MIC为4μg/mL、8μg/mL的耐药菌株中parC只出现了突变S80R。在敏感性下降和耐药菌株中均未检测出qnrA、qnrB、qnrS、aac6Ibcr、oqxAB、qepA基因,说明无耐药质粒介导的耐药机制。【结论】恩诺沙星对球虫感染鸡肠道大肠杆菌的耐药性产生了显著的影响,多次低剂量给药只能诱导出低敏感菌株,而多次高剂量给药可以诱导出鸡肠道大肠杆菌的高水平耐药,这些耐药菌以耐药基因突变为主,不产生耐药质粒介导的耐药机制。