【摘 要】
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自发病犬中分离到1株细小病毒,提取CPV的基因组DNA为模板,经PCR扩增出VP1全基因并进行序列测定,与BR8155-00株VP1全基因序列和氨基酸序列相比较,它们的核苷酸同源性为99.47%,
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自发病犬中分离到1株细小病毒,提取CPV的基因组DNA为模板,经PCR扩增出VP1全基因并进行序列测定,与BR8155-00株VP1全基因序列和氨基酸序列相比较,它们的核苷酸同源性为99.47%,氨基酸同源性99.17%。将VP1基因克隆到真核表达质粒pcDNA3中,构建了CPV VP1基因的真核表达质粒peDNA3-VP1。用制备的基因疫苗免疫Balb/c小鼠,免疫三次后,间接ELISA法检测免疫小鼠,结果表明,免疫小鼠可以产生免疫应答。免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG4000作用下融合,经间接ELISA法筛选,获得三株稳定分泌抗犬细小病毒VP1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为A8、F4和D5,用间接ELISA方法测定杂交瘤细胞培养上清,效价为1:16至1:32之间。接种小鼠腹腔产生单抗腹水,腹水的ELISA效价为1:2560至1:5120之间。
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