论文部分内容阅读
目的：本课题旨在建立小鼠的急性眼内炎症模型,在此基础上探讨MyD88在热灭活金黄色葡萄球菌碎片(HKSAF)诱导的眼内炎症调控中的作用,以期发展以MyD88为靶点的早期干预手段,为临床革兰阳性细菌性眼内炎的抗炎治疗提供新的策略和理论基础.方法：1.通过玻璃体腔内注射HKSAF来构建小鼠急性眼内炎症模型.利用体内观察炎症评分、眼球病理组织切片HE染色进行模型的鉴定；利用PT-PCR技术、Western blot技术以及Real-time PCR技术评估TLR 2/MyD88信号通路的活化；2.在小鼠玻璃体腔内注射MyD88抑制剂/PBS,1小时以后HKSAF玻璃体腔注射.通过体内炎症评分和眼球病理组织切片HE染色观察外周炎症细胞的眼内浸润和视网膜组织结构的完整性,使用Western blot技术以及Real-time PCR技评价MyD88抑制以后对NF-Kb的活化和炎症因子表达的影响；3.利用SPSS 13.0软件对实验结果进行统计分析,P＜0.05被认为是差异有统计学意义.结果：1.TLR2、 MyD88存在于正常C57BL/6小鼠的视网膜中；2.小鼠玻璃体腔内注射热灭活金黄色葡萄球菌碎片,在术后12小时,24小时,48小时的平均眼内炎症评分明显高于空白对照组以及阴性对照组,P＜ 0.05；眼球切片HE染色显示造模后12小时开始出现以中性粒细胞浸润为主的炎症反应并呈现逐渐加重的趋势并在24小时达到高峰,此后逐渐减轻直至72小时趋于平静.3.TLR2 mRNA水平的表达在HKSAF玻璃体腔注射以后呈现上调趋势；造模以后p-IKb的表达逐渐增强并在2小时达到高峰,随之变化的是IKb的表达逐渐降低；4.玻璃体腔注射MyD88抑制剂组的小鼠,在24小时和48小时的平均眼内炎症评分明显低于PBS玻璃体腔注射的阴性对照组,P＜ 0.05；眼球切片HE染色显示24小时炎症细胞的浸润和视网膜组织结构的破坏明显减轻；在2小时p-IKb的表达量是阴性对照组的1/3；在6小时炎症因子IL1β、 TNF-α、IL-6在mRNA水平的表达各为阴性对照组的1/5、1/3、1/5,P＜0.05；结论：1.通过玻璃体腔内注射HKSAF成功建立了小鼠急性眼内炎症模型,为研究革兰阳性细菌感染性眼内炎的急性炎症调控提供了有效的载体；2.热灭活金黄色葡萄球菌碎片通过TLR2/MyD88信号通路开启炎症反应,同时上调C57BL/6小鼠视网膜TLR2mRNA的表达；3.抑制MyD88的功能以后能够有效的抑制NF-Kb的活化、减少炎症因子的表达和炎症细胞的浸润,在明显抑制急性眼内炎症的同时视网膜组织结构也得到了理想的保护.MyD88可能成为急性眼内炎症使用药物预防、治疗的新靶点.