鞘脂(Sphingolipids)是一类极为重要的脂质小分子,参与细胞中各种关键的生物学过程。对生物体内鞘脂组的整体分析-鞘脂组学(Sphingolipidomics)研究,有望为相关疾病的早期诊断、生物标志物的发现和疾病发生机制的探索等提供新契机。由于鞘脂类化学结构和性质的复杂多样性以及在体内极宽的浓度范围,建立全面、灵敏以及准确的鞘脂组学分析方法,是该领域研究中的重要任务。为此,我们在本课题组前期研究[1]的基础上,采用改进的单相提取和UHPLC-QTOF-MS技术,建立了人血清中10大类鞘脂同时定性、定量分析的新方法。主要研究内容如下:(1)在经典(糖)鞘脂提取方法的基础上,设计和比较了4种方案对血清鞘脂的提取效果(图1左),并最终确立了"甲醇/氯仿/水体系结合37℃碱水解(去除磷脂干扰)"的提取方法,较之以往报道具有处理时间短、基质干扰小和提取种类多等优点;(2)在优化的色、质谱条件下,从人血清中鉴定出包括鞘氨醇(Sa&So)、鞘磷脂(SM)、神经酰胺(Cer)、己糖神经酰胺(Hex Cer)、乳糖神经酰胺(Lac Cer)、单唾液酸神经节苷脂(GM3)等在内的146种鞘脂,尤其是通过UHPLC高效分离和QTOF-MS高分辨二级质谱检测,部分消除了常规分析中普遍存在的同位素以及同分异构体干扰,使得先前被掩盖的多种低丰度鞘脂能够被准确定性和定量(图1右);(3)对所建立的鞘脂组学分析方法进行方法学验证,结果表明,10种鞘脂内标的加标回收率为83.9-100.4%,日内及日间重复性分别低于8.6%和12.2%,检出限(LOD)范围为1.56-33.52 pmol/m L。该方法是目前为止在血液中单次检测鞘脂数目最多的一种分析方法,将为我们开展老年痴呆、糖尿病等方向的深入研究提供良好的技术平台。