高分辨熔解曲线技术快速筛查结核分枝杆菌PncA基因突变

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目的 :应用高分辨熔解曲线(High-resolution Melting,HRM)技术建立快速检测结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药性的方法。方法 :收集深圳市慢性病防治中心2007-2009年耐药监测项目中的临床分离菌株,基因测序法检测PncA基因突变情况,选取49株突变型菌株和78株野生型菌株作为研究对象,建立HRM检测PncA基因突变方法,并应用于吡嗪酰胺耐药性的评估。以BACTEC MGIT960结果为金标准,评价HRM的应用价值。结果 :49株突变型菌株中,HRM检测到48株突变,I株双突变位点误判为野生型,78株野生型菌株中HRM检测6株突变型。BACTEC MGIT960药敏方法测定,127株临床分离株中,吡嗪酰胺耐药62株,敏感65株:62株耐药株中HRM结果显示53株耐药,65株敏感株中HRM结果显示64株敏感。以BACTEC MGIT 960为药物敏感性金标准,灵敏度为85.5%,特异度为98.4%,一致率0.842。结论 :高分辨熔解曲线检测吡嗪酰胺耐药,与BACTECMGIT960检测结果比较具有很好一致性,且具有快速、简便的优点,有较好临床应用前景。
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