论文部分内容阅读
【目的】观察蝎毒多肽提取物（polypeptide extract from scorpion venom,PESV）对人肝癌细胞（HepG2）的毒性作用及对小鼠肝癌H22细胞肝脏原位移植瘤的抑制作用,探讨对肿瘤浸润自然杀伤细胞（natural killer cells,NK）的免疫调节作用。【材料和方法】应用MTT法检测不同浓度、时间PESV对HepG2细胞的毒性作用,碘化丙啶（PI）标记的流式细胞术观察细胞周期变化;C57BL/6小鼠肝脏接种H22肝癌细胞株悬液构建原位移植瘤模型,分组用药连续14天,观察比较各组小鼠给药后的肿瘤体积、肿瘤质量及生存期变化,HE染色比较各组肿瘤组织形态学变化,流式细胞术和免疫组化检测肝脏及癌组织中浸润NK1.1+细胞的比例及分布特点,real-time PCR法检测癌组织中穿孔素、颗粒酶B的表达。【结果】PESV对HepG2细胞具有一定的毒性作用,可抑制细胞增殖,作用呈现剂量、时间依赖性,能使细胞滞留在G1期,减少S期及G2/M期的细胞比例,PESV作用后镜下可见HepG2细胞边缘模糊,突触减少,且有明显凋亡小体出现。体内实验证实PESV能显著抑制H22细胞肝脏原位移植瘤的生长,肿瘤体积和肿瘤质量均显著降低,抑制率可达30.77%,差异具有统计学意义（p<0.05）;能显著延长荷瘤小鼠生存时间,生命延长率为34.06%,差异具有统计学意义（p<0.05）;HE染色显示与荷瘤对照组相比,PESV大剂量组出现明显坏死区,细胞异型性减轻;PESV大剂量组小鼠肝脏NK细胞占肝脏总淋巴细胞的比例是（5.91±0.49）%,显著高于荷瘤对照组（3.69±0.50）%,差异具有统计学意义（p<0.05）,且大量浸润分布在肿瘤组织及癌旁组织中;PESV大剂量组瘤组织中穿孔素和颗粒酶B的mRNA表达量分别是荷瘤对照组的3.62倍和5.82倍,差异具有统计学意义,（p<0.05）。【结论】PESV对HepG2细胞具有一定的毒性作用,并且能通过提高H22细胞肝脏原位移植瘤中浸润NK细胞的比例,促进NK细胞向肿瘤组织迁移,诱导穿孔素和颗粒酶B的产生,促使NK细胞活性的恢复,增强对肿瘤细胞的清除,抑制肿瘤的浸润生长。