研究背景近年来,随着人类生活水平的提高和饮食结构的改变,特别是海鲜及啤酒等高嘌呤饮食的大量摄入,高尿酸血症的发病率逐年上升,已成为严重威胁人类健康的代谢性疾病之一,并呈现出低龄化的趋势。现代大量临床研究数据显示,高尿酸血症与心血管疾病、肥胖、糖尿病等有着密切的关联,而且高尿酸血症还是高血压、冠心病、Ⅱ型糖尿病、肾脏疾病的独立危险因子。因此,开展高尿酸血症的预防和治疗,具有重要的临床意义。课题组前期研究发现菊苣可显著降低高嘌呤饮食诱导的鹌鹑高尿酸血症模型的血尿酸(UA)水平,但其发挥降尿酸药效的物质基础不明确,这也成为菊苣质量评价制定的一个瓶颈。因此,本研究以菊苣治疗高尿酸血症为切入点,应用“谱效关系”理论,开展菊苣降尿酸的物质基础研究,阐明中药菊苣发挥降尿酸的化学成分；并在“谱-效”筛选结果及前人研究成果的基础上,结合“一测多评”(QAMS)技术,建立菊苣的QAMS质量评价新方法,旨在为完善菊苣的质量评价提供依据和参考,从而使菊苣更好地应用于临床。研究目的1.通过构建菊苣降尿酸的“谱效关系”,阐明菊苣发挥药效的物质基础。2.结合QAMS技术,建立菊苣地上部分药材的QAMS新方法,为菊苣地上部分药材的质量评价提供参考和依据。研究方法1.菊苣降尿酸的物质基础研究：选择不同来源的10批菊苣地上部分作为研究对象,采用高效液相色谱法(HPLC)获得各产地的指纹图谱,从化学水平获得各产地菊苣的化学信息；采用高嘌呤饮食诱导鹌鹑高尿酸血症模型,从动物水平获得各产地菊苣的降尿酸药效。通过相关分析法(CA)和偏最小二乘回归(PLSR)法构建菊苣降尿酸的“谱效关系”,筛选出与降尿酸药效关系密切的特征峰。2.“谱效关系”筛选结果的合理性验证：采用液质联用(LC-MS/MS)技术,对筛选出菊苣药材中特征峰的化学成分进行指认,并在此基础上采用筛选出的化学单体进行降尿酸药效学实验,从而验证“谱效关系”筛选结果的合理性。3.菊苣“一测多评”方法的建立：分别采用3台不同的HPLC仪器,3种不同的C18色谱柱进行相对校正因子(RCF)的耐用性考察。进而采用各化合物的RCF计算10批菊苣地上部分药材中相应活性成分含量,并与外标法(ESM)所测含量比较,以评价QAMS的准确性。研究内容本课题研究分两个方面：文献综述和实验研究。文献综述文献综述部分主要对菊苣的化学成分、药理作用的研究进展进行阐述,并对中药“谱效关系”的研究内容、相关数据处理方法、特征峰的辨识等核心问题的研究进展进行系统回顾和总结。实验研究第一章不同产地菊苣HPLC指纹图谱和降尿酸药效研究采用HPLC指纹图谱技术,建立菊苣HPLC指纹图谱的分析方法并完成方法学考察,获得10批菊苣地上部分药材的HPLC指纹图谱,挖掘能够表征菊苣地上部分药材的化学信息；此外,采用高嘌呤饮食诱导鹌鹑高尿酸血症模型,分别给以10批不同产地菊苣地上部分药材,获得不同产地菊苣的降尿酸药效信息,为接下来“谱效关系”的构建提供“谱”和“效”信息。第二章菊苣降尿酸的“谱效关系”研究采用CA和PLSR两种数据处理方法建立菊苣指纹图谱信息与降尿酸药效信息之间的“谱效关系”,并结合两种数据处理结果,筛选出与降尿酸药效相关的特征峰,采用LC-MS/MS技术获得各特征峰的碎片离子信息及保留时间等,通过与文献相关报道及标准品信息对比,确定各特征峰的化学成分,并在此基础上,对筛选出的部分化学成分进行初步的降尿酸药效实验,以验证“谱-效”筛选结果的合理性。第三章菊苣“一测多评”质量评价模式的建立在“谱效关系”筛选结果及前人研究成果的基础上,选出一个含量适当、性质稳定的化合物作为内参物,建立该化合物与其余化合物的RCF,根据RCF计算出其余化合物的含量,同时采用ESM法测得药材中各化学成分的含量,并比较二者的差异,从而验证QAMS方法的准确性和可行性。研究结果1.菊苣地上部分药材的HPLC指纹图谱相似度分析结果显示10批菊苣样本与菊苣对照图(R图)谱的相似度均大于0.759。当L=11时,聚类分析将10批药材聚为3类。各产地菊苣均显示不同程度的降尿酸药效,特别是来自北京海淀、新疆昌吉的菊苣样品降尿酸药效最好。2.通过“谱效关系”研究,筛选出菊苣地上部分发挥降尿酸药效的化学成分可能是秦皮甲素、绿原酸、菊苣酸、异绿原酸B、异绿原酸A及特征峰11；并对秦皮甲素、绿原酸、菊苣酸进行了初步的药效验证,发现三者均具有显著的降尿酸药效,初步验证了谱效筛选结果的合理性。3.秦皮乙素与绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A的RCF分别为1.3339、0.8721、0.7658,且建立的菊苣地上部分药材的QAMS计算值与ESM实测值之间没有显著差异,RSD<5%,实验所得的RCF可信。研究结论1.不同产地菊苣指纹图谱化学成分存在差异,这些成分差异可能是导致菊苣降尿酸药效差异的基础。2.菊苣降尿酸“谱效关系”研究提示秦皮甲素、绿原酸、菊苣酸、异绿原酸B、异绿原酸A及特征峰11可能是菊苣发挥药效的物质基础。3.建立菊苣QAMS质量评价方法,为菊苣的质量控制和评价提供参考,从而使菊苣更好地应用于临床。创新点1.首次开展菊苣降尿酸的“谱效关系”研究,初步揭示菊苣地上部分药材发挥药效的物质基础。2.首次结合QAMS技术,建立菊苣QAMS质量评价新方法,为菊苣的质量评价提供参考和依据。