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目的：本研究目的在于建立荧光定量PCR检测新生儿干血斑标本中CMV-DNA的实验方法,并进行方法学的评价.方法：确立并合成CMV-gB段的引物和探针,构建含该引物扩增的巨细胞病毒(CMV)片段的质粒,检测CMV毒株(AD169株)的浓度.用全血将该病毒株进行10倍的梯度稀释后,滴在滤纸片上制备成干血斑.抽提干血斑的DNA,经荧光定量PCR方法检测获得该方法的灵敏度和最低检测限.通过检测20份同一浓度的CMV毒株DNA,计算批内精密度;通过连续3天检测两个浓度的CMV毒株DNA,计算批间精密度.收集来自于复旦大学附属儿科医院确诊为CMV先天感染(血CMV-IgM阳性,或血/尿CMV-DNA阳性,或两者均阳性)的新生儿干血斑标本9份,以本实验方法进行验证.从上海市浦江卫生院收集120份出生3天内的新生儿干血斑标本,对检测得到的阳性标本进行测序验证.结果：本方法检测到CMV-DNA的最低检测限为4.44×103copies/ml;检测的灵敏度为2.66copies/25ul反应体系.浓度为4.44×106copies/ml的CMV毒株的批内和批间精密度分别为0.74％和1.39％;浓度为4.44×104copies/ml的CMV毒株的批内和批间精密度分别为1.04％和1.84％.临床上确诊为先天性CMV感染的9份新生儿干血斑标本中,有7份干血斑法检测为CMV-DNA阳性.120例新生儿干血斑标本中,检测出两例CMV-DNA阳性,以套式PCR方法复测,结果仍为阳性,对套式PCR产物进行正反向测序后显示其均为CMV的目的序列,提示这两名新生儿为先天性CMV感染.结论：成功建立了一种可用干血斑中微量CMV病毒检测的荧光定量PCR方法,该方法具有快速、灵敏、准确、精密度高的优点,可利用目前广泛采取的用于新生儿遗传代谢病筛查的干血斑,进行大规模CMV病毒感染的筛查,为我国新生儿先天性CMV感染的准确诊断奠定了良好的实验室基础.