利用Gateway技术构建番茄TFT1和TFT10基因RNAi表达载体

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<正>番茄果实中积累的糖的种类及其含量对果实的品质和风味有重要影响,蔗糖代谢相关酶活性与果实糖积累之间存在密切关系,而其中蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性的高低影响蔗糖的合成能力和光合同化的碳在淀粉和蔗糖之间的分配。14-3-3蛋白作为小分子调节蛋白,能够与多种靶蛋白相互作用来调节靶蛋白活性,进而调控细胞的多种生理过程。通过生物信息学预测显示,14-3-3蛋白家族中的TFT1和TFT10最有可能与SPS互作而调节SPS的活性。Gateway技术主要是根据噬菌体位点特异性重组的原理,在不同的质粒之间交换DNA片段,并维持基因定位和起始位点不变。本课题组根据Micro-Tom番茄TFT1和TFT10基因序列设计特异性引物,利用Gateway技术通过TOPO克隆和LR反应构建RNAi表达载体,以探讨14-3-3蛋白对SPS的调控作用,从而为深入研究蔗糖代谢的机理奠定基础。
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