【摘 要】
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目的 研究膜骨架蛋白4.1R对光动力(photodynamic therapy,PDT)效应的影响,为临床上光动力疗法治疗癌症提供更合理的个体治疗方案.方法 以野生型与4.1R基因敲除型小鼠胚胎
【机 构】
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河南省(郑州大学)医药科学研究院郑州大学生命科学学院
【出 处】
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2014年肿瘤多学科综合诊治新进展学术研讨会
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目的 研究膜骨架蛋白4.1R对光动力(photodynamic therapy,PDT)效应的影响,为临床上光动力疗法治疗癌症提供更合理的个体治疗方案.方法 以野生型与4.1R基因敲除型小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)为研究对象,收集处于对数生长期的4.1R+/+ MEF与4.1R-/-MEF细胞,以2×104/孔接种于96孔板,分别以不同照射能量密度(72,96,120,180,240mJ/cm2)、不同浓度的5-氨基乙酰丙酸(0.25,0.5,1,1.5,2mmol/L),不同孵育时间(2,4,6,8,10h)介导PDT,450nm蓝光辐照后更换含10％胎牛血清的培养基继续孵育24h,CCK-8法检测各孔细胞数并计算细胞存活率；细胞以1mmol/L 5-ALA孵育4h,激光共聚焦显微镜检测胞内产生的光敏剂原卟啉(PpIX)在细胞中的定位；细胞经不同浓度5-ALA(0.25,0.5,1,1.5,2mmol/L)孵育,荧光分光光度计检测胞内PpIX的荧光强度；Western blot法检测原卟啉(PpIX)合成限速酶亚铁螯合酶(FECH)与胆色素原脱氨基酶(HMBS)蛋白质水平.结果 5-ALA-PDT处理后,能够杀伤两种细胞,其杀伤作用大小与5-ALA的浓度、孵育时间及激光剂量呈正相关,激光能量为120mJ/cm2,5-ALA浓度为1mmol/L,孵育4h时杀伤作用最明显,MEF(4.1R+/+)与MEF(4.1R-/-)细胞存活率分别为：68.3％+3.67与11.3％+4.51,有显著性差异(P＜ 0.01)；5-ALA孵育细胞后可以产生光敏剂原卟啉,原卟啉分布于整个胞质中；荧光分光光度计表明PpIX荧光强度随5-ALA浓度的增加而增加,在1mmol/L处基本达到饱和,两种细胞中存在显著性差异(P＜0.01)；Western blot结果表明限速酶亚铁螯合酶(FECH)与胆色素原脱氨基酶(HMBS)在两种细胞中表达水平没有差异.结论 蛋白4.1R的缺失使细胞内合成原卟啉的量减少,PDT治疗效果下降,其可能原因是蛋白4.1R作为膜骨架蛋白影响了5-ALA的跨膜转运,进而影响细胞内原卟啉的合成,最终使得PDT的治疗效果下降.
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