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粘膜免疫与多价疫苗是未来免疫预防传染病的重要方向，以细菌为载体的重组活疫苗是其最有发展前景的研究领域之一。本研究利用Asd+平衡致死系统构建表达巴氏杆菌毒素(Pasteurella multocida toxin，PMT)的重组猪霍乱沙门氏菌株，并对重组菌株的生物学特性进行比较研究。通过基因克隆的方法构建表达PMT的重组质粒pYA-PmtC，再将其电转化减毒猪霍乱沙门氏菌C500的asd基因缺失株C501，构建口服活疫苗菌株C501(pYA-PmtC)。
生化鉴定结果表明，重组菌株C501(pYA-PmtC)与载体菌株C501(pYA3493)不能利用乳糖、蔗糖、阿拉伯糖、半乳糖醇和尿素作为唯一碳源，但能利用一些其他糖类作为唯一碳源，这些生化指标与亲本菌株C500相同。同时发现重组菌株C501(pYA-PmtC)的血清型和生长速度与亲本菌株C500-致;在没有选择压力的条件下，C501(pYA-PmtC)能够稳定遗传重组质粒及其外源基因片段，并能稳定，高效、分泌性表达30.5 kDa的外源保护性抗原rPmtC。通过生物学软件Bio-Rad Quantity One对SDS—PAGE结果进行分析，发现重组蛋白rPmtC的总表达量约占菌体总蛋白的3.3％。其中，在菌体中的表达量约占总表达量的69.6％，分泌到上清液中的表达量(分泌性表达)占31.4％。C501(pYA-PmtC)腹腔感染BALB/c小鼠的LD50为8.5×106 CFU，毒力稍低于C500(LD50为4.4×106 CFU);口服接种C501(pYA-PmtC)和C500的所有仔猪未见任何发病症状，两者没有显著差别。本研究利用Asd+平衡致死系统的原理构建表达T+Pm保护性抗原重组猪霍乱沙门氏菌弱毒菌株c501(pYA-PmtC)，为进一步开发猪萎缩性鼻炎-副伤寒的双价基因工程疫苗奠定基础。