【摘 要】
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目的：本研究拟从变形链球菌UA159基因组DNA中扩增出编码GbpA的功能区基因片段gg和编码SpaP的P区基因片段sp,并将这两个片段连同一段信号肽序列克隆至真核表达载体pVAX1,构建真核表达质粒pVAX1-SSG,为其在免疫防龋中的进一步研究打下实验基础.方法：变形链球菌UA159GbpA的GBD区基因和SpaP的P区基因的克隆和序列分析,常规厌氧培养S.mutans UA159,提取细菌基
【出 处】
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广东省口腔医学会第三次会员代表大会暨第十次学术会议
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目的：本研究拟从变形链球菌UA159基因组DNA中扩增出编码GbpA的功能区基因片段gg和编码SpaP的P区基因片段sp,并将这两个片段连同一段信号肽序列克隆至真核表达载体pVAX1,构建真核表达质粒pVAX1-SSG,为其在免疫防龋中的进一步研究打下实验基础.方法：变形链球菌UA159GbpA的GBD区基因和SpaP的P区基因的克隆和序列分析,常规厌氧培养S.mutans UA159,提取细菌基因组DNA作为模板；设计两对引物,采用PCR法扩增GbpA的功能区(GBD区)的基因片段gg和SpaP的P区基因片段sp；用重叠延伸PCR法扩增信号肽基因(signal).将获取的三个基因片段分别插入pMD20-T克隆载体中,转化感受态细胞E.coli DH5α,测序.嵌合体DNA疫苗pVAX1-SSG真核表达质粒的构建：将signal、gg和sp三个基因片段分别双酶切,并将同样进行双酶切的pVAX1质粒在T4DNA连接酶作用下进行连接反应,获得嵌合体质粒pVAXl-SSG,并转化感受态细胞Ecoli DH5α,提取纯化pVAX1-SSG,进行质粒RCR,酶切电泳鉴定并测序.结果：成功克隆gg和sp基因和一段信号肽基因；序列分析结果与设计基因序列一致；通过双酶切后连接反应,构建了pVAX1-SSG.结论：成功构建了嵌合体真核表达质粒pVAX1-SSG.
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