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目的：应用PCR-荧光探针法快速检测结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌。方法：PCR-荧光探针法对1015例临床标本和56株临床分离株进行临床研究，与达安公司结核分枝杆菌检测试剂盒检测结果比较。结果：1015例临床标本中检测出11例NTM核酸阳性标本(1.08％)，检测结核分枝杆菌敏感度为50.3％，特异性98.9％1对138例标本重复两次检测，符合率100％。经16s rDNA测序确认，准确率100％；对56株临床分离株检测，检测准确率100％。与达安公司结核分枝杆菌检测试剂盒检测结果比较，总体符合率95.1％，经统计学分析(p=0.226)，两者之间没有显著性差异。结论：PCR-荧光探针法可快速检测和区分结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌，有利于指导临床开展早期有效的化疗。