【摘 要】
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目的 利用噬菌体展示随机12肽库筛选结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的模拟表位,检测其在结核病血清学诊断中的应用价值,为制备灵敏、特异的结核病诊断试剂奠定基础.方法 以初步纯化的结核病人阳性血清为靶分子,对噬菌体展示随机12肽库进行3轮生物淘选,再以阴性血清为靶分子,对文库进行2轮负筛选以去除非特异噬菌体.收集淘选后的噬菌体进行扩增培养,利用碘化钠法提取
【机 构】
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南华大学病原生物学研究所,“特殊病原体防控”湖南省重点实验室,衡阳421001 中国疾病预防控制中
【出 处】
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21世纪第五届全国人兽共患病学术研讨会
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目的 利用噬菌体展示随机12肽库筛选结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的模拟表位,检测其在结核病血清学诊断中的应用价值,为制备灵敏、特异的结核病诊断试剂奠定基础.方法 以初步纯化的结核病人阳性血清为靶分子,对噬菌体展示随机12肽库进行3轮生物淘选,再以阴性血清为靶分子,对文库进行2轮负筛选以去除非特异噬菌体.收集淘选后的噬菌体进行扩增培养,利用碘化钠法提取其单链DNA进行测序,分析其外源氨基酸以推导出核心序列,并对核心序列进行BLAST比对分析；用ELISA和斑点免疫印迹试验检测阳性噬菌体与结核病阳性血清结合的特异性.固相法合成筛选到的两条多肽,经质谱鉴定后用反相高效液相色谱法进行纯化,用间接ELISA检测合成多肽与70例阳性血清结合的特异性,并检测其是否与肺炎支原体(32例)和肺炎衣原体血清(32例)存在交叉反应.结果 进行3轮生物淘选后,噬菌体克隆得到明显富集；随机挑取的38个噬菌体克隆中,共出现8种不同的外源性多肽序列,根据8条多肽序列中氨基酸出现的重复次数,推导出两条核心序列,BLAST比对的结果表明：没有搜索到与两条序列完全一致的序列,但与MTB多个抗原具有较高的同源性,第一条序列与乙醛脱氢酶的同源性最高(8/12),第二条序列与MTB转位酶的同源性最高(7/9),说明两条序列可能为MTB的模拟表位.ELISA和斑点免疫印迹试验的结果表明：8个代表性噬菌体均能与结核病人阳性血清发生特异结合.固相合成的两条多肽在结核病临床血清学检测中具有较高的特异性与敏感性.结论 成功筛选到MTB的2个模拟表位,该模拟表位在结核病的血清学诊断中具有潜在的应用价值.
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