【摘 要】
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目的:探讨Erlotinib获得性耐药的非小细胞肺癌细胞株HCC827-TR的相关耐药机制.方法:体外培养人肺腺癌细胞株HCC827并采用Erlotinib诱变和药物筛选建立Erlotinib获得性耐药细
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目的:探讨Erlotinib获得性耐药的非小细胞肺癌细胞株HCC827-TR的相关耐药机制.方法:体外培养人肺腺癌细胞株HCC827并采用Erlotinib诱变和药物筛选建立Erlotinib获得性耐药细胞株HCC827-TR,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HCC827-P和HCC827-TR细胞对Erlotinib的敏感性,抽取基因组DNA筛选两株细胞间的差异基因,抽提基因组DNA、RNA,对表皮细胞生长因子受体(EGFR)基因19-2l外显子进行聚合酶链反应(PCR)扩增及测序,对c-MET基因、PTEN基因进行扩增,采用Western blot法检测HCC827-P和HCC827-TR细胞中pERK和p-AKT蛋白的表达水平.结果:(1)MTT方法检测结果表明,HCC827-P的半数致死率＜100nM,而HCC827-TR细胞的半数致死率＞20000Nm;(2)基因芯片的结果示,两株细胞间存在与肺癌相关的差异基因;(3)PCR、RT-PCR检测结果,两株细胞均无EGFR-T790M二次突变,两株细胞的c-MET基因拷贝数、c-MET基因表达量、PTEN基因表达量无差异,Western-blot结果显示:p-ERK、p-AKT在两株细胞内表达无差异,而Erlotinib可显著抑制HCC827-P细胞内的两种蛋白,而在HCC827-TR 细胞内抑制作用不明显.结论:(1)成功制备了HCC827-TR耐药细胞系.(2)基因芯片的分析结果为进一步研究耐药机制提供了很好的方向指导.(3)HCC827-TR对Erlotinib耐药与EGFR T790M突变无关;与PTEN表达缺失无关;与MET基因扩增的关系尚不明确,待进一步探讨.(4)HCC827-P细胞内Erlotinib可显著抑制EGFR下游信号通路,而对HCC827-TR细胞抑制作用不显著.
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