【摘 要】
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本研究旨在建立一套适合辣椒同型不育系和同型保持系幼苗时期蛋白质组学分析的电泳体系,为进一步探讨辣椒雄性不育机制奠定基础.取1 g苗龄为50 d的辣椒幼苗(此时植株有8～10片真叶),用超纯水冲洗干净,加入0.1g丙酮溶液Ⅰ(含10％三氯乙酸TCA、0.07％β-巯基乙醇、89.93％丙酮),液氮冰浴研磨至细粉状,转入离心管,-20℃静置1h,于4℃、20 000×g下离心30 min,弃上清液；加
【机 构】
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贵州省园艺研究所,贵阳55000;贵州省农科院山茂园艺工程技术有限公司,贵阳550009 贵州省辣
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本研究旨在建立一套适合辣椒同型不育系和同型保持系幼苗时期蛋白质组学分析的电泳体系,为进一步探讨辣椒雄性不育机制奠定基础.取1 g苗龄为50 d的辣椒幼苗(此时植株有8～10片真叶),用超纯水冲洗干净,加入0.1g丙酮溶液Ⅰ(含10％三氯乙酸TCA、0.07％β-巯基乙醇、89.93％丙酮),液氮冰浴研磨至细粉状,转入离心管,-20℃静置1h,于4℃、20 000×g下离心30 min,弃上清液；加入5mL丙酮提取液Ⅱ(含0.07％β-巯基乙醇),悬浮后于-20℃静置1h,于4℃、20 000×g下离心30 min,弃上清液；沉淀制成干粉,于-20℃保存备用.上样前加入25 mL蛋白裂解液(含10 mol·L-1尿素,40 mmol·L-1 Tris,2％CHAPS,1％DTT),重新悬浮沉淀,液氮与35℃重复冻融3次,4℃、20 000×g下离心25 min,取上清液供双向电泳分析.采用Bio-Rad的IPGphor等电聚焦系统,用PH3-10和PH4-7预制干胶条.用胶条泡涨母液处理胶条.第一向固相pH梯度等电聚焦：pH4-7胶条水化,SDS平衡液200 mL,平衡20 min.第二向垂直板SDS-PAGE电泳,采用13％聚丙烯酰胺凝胶,0.1％考马斯亮蓝R-250染色,快脱色液脱色,扫描保存,使用PDQquest软件处理图像,并进行相关分析.
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