论文部分内容阅读
ATP结合盒膜通道转运蛋白（ATP-binding cassette,（ABC）transporters）能与抗肿瘤药物结合,利用ATP水解时释放的能量,将化疗药物泵出细胞外,从而降低其细胞毒作用,并导致多药耐药。而Nerat i nib是一种口服的不可逆的小分子酪氨酸激酶抑制剂,通过与ATP结合位点结合而选择性抑制EGFR和Her-2等激酶活性。因此,本研究对酪氨酸激酶抑制剂neratinib与ABC转运蛋白的关系进行了探讨。Neratinib不仅显著逆转ABCB1过表达细胞对ABCBl底物阿霉素,长春新碱和紫杉醇的耐药性。更重要的是,neratinib体外显著增加从白血病患者骨髓中分离出来的ABCBl高表达白血病细胞对阿霉素的药物敏感性;体内显著增加ABCB1高表达细胞KBv200对传统抗癌药物敏感性,联合用药组抑瘤率为41.29%。机理研究表明,neratinib浓度依赖性地增加阿霉素和罗丹明123在ABCB1高表达细胞中的积累,以及罗丹明123在ABCB1高表达白血病细胞中的积累。同时,neratinib对ABCB1在蛋白和mRNA水平的表达均没有显著影响,但neratinib在较低浓度下能明显激活ABCB1ATPase活性而在较高浓度抑制其活性,并且抑制125I-IAAP对P-gp的光结合性标记(IC50=0.24 Pmol几)。Docking模拟neratinib与ABCB1最可能的结合位点,从计算机模拟角度佐证了TKIs与人源ABCB1的交叉反应。这些结果说明neratinib通过抑制ABCB1药物外排泵功能增加MDR细胞内的药物浓度,从而恢复MDR细胞对化疗药物的敏感性。Neratinib在有效逆转浓度下对Akt磷酸化水平没有明显阻断作用;表明neratinib逆转MDR与Akt通路的阻断作用无关。通过实验我们证明:Neratinib通过抑制ABCB1药物外排泵功能,在体内和体外逆转ABCB1介导的MDR,对指导临床联合用药具有一定意义。Neratinib在体外增加ABCB1底物阿霉素对ABCB1高表达白血病患者的白血病细胞的细胞毒作用,为克服白血病多药耐药提供理论依据。Neratinib对ABCG2和ABCC1介导的MDR没有明显逆转作用。