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目的:观察p53基因修饰、制备的树突状细胞(DC)瘤苗在体内外的特异性杀瘤效应,探讨通过基因修饰肿瘤抗原来提高DC瘤苗的抗肿瘤免疫效应的可能.
方法:1、野生型p53质粒转染黑色素瘤B16细胞,Real-time PCR和Western blot检测p53转染前、后的表达;冻融法提取p53修饰的肿瘤抗原(p53-Ag),体外冲击同基因Km小鼠骨髓来源的树突状细胞,制得DC瘤苗.2、MTT法检测DC瘤苗对淋巴细胞的刺激增值效应(MLR)及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)体外杀瘤效应.3、背部皮下接种B16细胞复制实体瘤模型,分别于接种后的第1、7、14d,分3次在瘤周注射DC瘤苗,每3天测量一次肿瘤最大垂直长、短径,计算瘤体球积和各组平均体积,描绘肿瘤生长曲线;第21d处死小鼠,取肿瘤组织和血液标本,称瘤重后计算各组平均瘤重,ELISA法检测血清IL-12和IFN-γ含量变化。
结果:1、p53质粒转染后的肿瘤细胞均有p53基因及产物的表达,用该p53修饰的肿瘤抗原冲击、制得的DC瘤苗完全符合成熟DC的形态特征:2、DC瘤苗的体外效应MLR:当刺激/效应细胞比值为1∶40时,B 16-DC组、p53-DC组明显高于DC组(P均＜0.05),p53-DC组也显著高于B16-DC组(P＜0.05);而比值为1∶80时,三组刺激指数虽有降低,但三组间差异的两两比较结果与1∶40时相同(P均＜0.05).CTL:以效/靶比为1∶20时的杀伤率最高,p53-DC组和B16-DC组均显著高于DC组(P＜0.01),p53-DC组也显著高于B16-DC组(P＜0.01);而效/靶比为1∶40时,三组杀伤率略有降低,但三组间两两比较,差异均十分显著(P均＜0.01).3、DC瘤苗的体内抑瘤效应接种后的肿瘤生长曲线显示,B16组小鼠成瘤最早,生长最快;DC组成瘤晚,生长缓慢;B16-DC组和p53-DC组则成瘤最晚,生长最慢,9天后瘤体仅米粒大,且大部分瘤体呈消退趋势.4、ELISA检测外周血细胞因子IL-12:各实验组血清IL-12含量均较B16组显著升高(P＜0.01),其中B16-DC组和p53-DC组明显高于DC组(P＜0.01),p53-DC组又显著高于B16-DC组(P＜0.01).IFN-γ:除DC组外,各实验组血清IFN-γ含量都较B16组显著升高(P均＜0.01),B16-DC组和p53-DC组均显著高于DC组(P均＜0.01),p53-DC组又明显高于B16-DC组(P＜0.05).p53-DC组的IL-12和IFN-γ含量均最高。
结论:1、p53基因修饰确能增强肿瘤抗原诱导特异性免疫应答的能力,其修饰的DC瘤苗对淋巴细胞的增殖刺激能力较未经修饰的DC更强;2、在体外,p53修饰的DC瘤苗能明显激发抗肿瘤免疫应答,提高T淋巴细胞对肿瘤细胞的特异性杀伤作用.3、在体内,p53修饰的DC瘤苗能显著地抑制移植性肿瘤的生长,并明显提高荷瘤动物外周血IL-12和IFN-γ的水平。