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目的:探讨靶向抑制miR-381对NEFL基因表达的调控,及其通过调控NEFL对胶质瘤细胞药物敏感性的影响及作用机制。
方法:通过靶基因预测和luciferase荧光素酶报告基因实验、Wesrtern blotting等实验检测miR-381对NEFL表达的影响.通过MTT、克隆形成实验及实时荧光定量PCR观察LNA-anti-miR-381与NEFL在胶质瘤U251细胞对替莫唑胺药物敏感性影响中的作用及其分子机制。
结果:(1)Luciferase荧光酶素报告基因检测、western blot实验证实NEFL是miR 381的直接调控靶基因;(2)在U251细胞中转染LNA-anti-miR-381可以上调NEFL蛋白的表达;(3)MTT及克隆形成实验表明,在U251细胞中过表达NEFL可以增加细胞对替莫唑胺化疗的敏感性;(4)在U251细胞中过表达NEFL的表达能够下调干性因子ALDH1、CD44、CKIT、Nanog、KLF4、SOX2、Nestin以及多药耐药因子ABCG2、ABCC3、ABCC5的表达;(5)LNA-anti-miR-381可以通过调节NEFL的表达调节干性因予ALDH1、CD44、CKIT、Nano g、KLF4、SOX2、Nestin以及多药耐药因子ABCG2、ABCC3、ABCC5的表达增加U251细胞对替莫唑胺的药物敏感性。
结论:靶向抑制miR-381能上调NEFL的表达,进而抑制多个干性分子以及耐药相关因子的表达来增强胶质瘤细胞对替莫唑胺的药物敏感性.miR-381可能是一个潜在的胶质瘤治疗靶点。