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目的:探讨血清对U937细胞分化成熟以及对细胞周期变化的影响,阐述血清在白血病细胞分化作用机制。
方法:应用乙酸肉豆蔻佛波醇(phorbol-12-myristate-13-acetata,PMA),诱导U937细胞分化。血清作为调节因素:分为血清组(FCS)、血清加PMA组(FCS+PMA)、无血清组(NOFCS)和无血清加PMA组(NOFCS+PMA),上述四组细胞培养24小时后通过倒置显微镜观察细胞的形态与细胞贴壁判定细胞的分化成熟状态,流式细胞仪测定细胞周期.取NOFCS和NOFCS+PMA组U937细胞培养24小时后,以1×106/瓶将其接种于含血清培养基培养瓶内进行培养,作为血清恢复组,培养24小时后通过倒置显微镜观察细胞的形态与细胞贴壁判定细胞的分化成熟状态,流式细胞仪测定细胞周期。取NOFCS和NOFCS+ PMA组U937细胞培养24小时后,以1x106/瓶将其接种于含血清培养基培养瓶内进行培养,作为血清恢复组,培养24小时后通过倒置显微镜观察细胞的形态与细胞贴壁判定细胞的分化成状态,流式细胞仪测定细胞周期。取血清加PMA组(FCS+PMA)细胞培养24小时后,分别置于无血清培养基与血清培养基内培养24小时后,通过倒置显微镜观察细胞的形态与细胞贴壁判定细胞的分化成熟状态,流式细胞仪测定细胞周期。
结果:PMA作用U937细胞24h后,FCS+ PMA组细胞贴壁生长,NOFCS+ PMA组细胞部分贴壁生长,贴壁率明显低于FCS+ PMA组,其他两组细胞悬浮生长:细胞周期测定显示;NOFCS, NOFCS+ PMA和FCS+ PMA与FCS组相比G1细胞明显增多,S期细胞明显减少有显著差异,P<0.05;上述三组之间细胞周期无显著差异。血清恢复实验结果显示NOFCS+ PMA经血清恢复后细胞贴壁率明显升高,与FCS+ PMA组相比无明显差异,细胞周期与NOFCS+ PMA相比无明显差异。NOFCS组经血清恢复后,细胞悬浮生长,细胞周期与NOFCS组相比G1期细胞下降,S期细胞明显增多,有显著差异,p<0.05;血清加PMA组在无血清培养与血清培养条件下,细胞都贴壁生长,二者贴壁率没有改变,细胞周期无显著差异。
结论:血清不影响PMA诱导U937细胞分化过程中细胞周期变化,但影响PMA诱导U937细胞分化过程中分化细胞的成熟。
方法:应用乙酸肉豆蔻佛波醇(phorbol-12-myristate-13-acetata,PMA),诱导U937细胞分化。血清作为调节因素:分为血清组(FCS)、血清加PMA组(FCS+PMA)、无血清组(NOFCS)和无血清加PMA组(NOFCS+PMA),上述四组细胞培养24小时后通过倒置显微镜观察细胞的形态与细胞贴壁判定细胞的分化成熟状态,流式细胞仪测定细胞周期.取NOFCS和NOFCS+PMA组U937细胞培养24小时后,以1×106/瓶将其接种于含血清培养基培养瓶内进行培养,作为血清恢复组,培养24小时后通过倒置显微镜观察细胞的形态与细胞贴壁判定细胞的分化成熟状态,流式细胞仪测定细胞周期。取NOFCS和NOFCS+ PMA组U937细胞培养24小时后,以1x106/瓶将其接种于含血清培养基培养瓶内进行培养,作为血清恢复组,培养24小时后通过倒置显微镜观察细胞的形态与细胞贴壁判定细胞的分化成状态,流式细胞仪测定细胞周期。取血清加PMA组(FCS+PMA)细胞培养24小时后,分别置于无血清培养基与血清培养基内培养24小时后,通过倒置显微镜观察细胞的形态与细胞贴壁判定细胞的分化成熟状态,流式细胞仪测定细胞周期。
结果:PMA作用U937细胞24h后,FCS+ PMA组细胞贴壁生长,NOFCS+ PMA组细胞部分贴壁生长,贴壁率明显低于FCS+ PMA组,其他两组细胞悬浮生长:细胞周期测定显示;NOFCS, NOFCS+ PMA和FCS+ PMA与FCS组相比G1细胞明显增多,S期细胞明显减少有显著差异,P<0.05;上述三组之间细胞周期无显著差异。血清恢复实验结果显示NOFCS+ PMA经血清恢复后细胞贴壁率明显升高,与FCS+ PMA组相比无明显差异,细胞周期与NOFCS+ PMA相比无明显差异。NOFCS组经血清恢复后,细胞悬浮生长,细胞周期与NOFCS组相比G1期细胞下降,S期细胞明显增多,有显著差异,p<0.05;血清加PMA组在无血清培养与血清培养条件下,细胞都贴壁生长,二者贴壁率没有改变,细胞周期无显著差异。
结论:血清不影响PMA诱导U937细胞分化过程中细胞周期变化,但影响PMA诱导U937细胞分化过程中分化细胞的成熟。