【摘 要】
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免疫原基因的密码子优化是提高DNA疫苗免疫保护效果的有效策略.不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)的HA基因(optiHA),并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室 中国农业科
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会
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免疫原基因的密码子优化是提高DNA疫苗免疫保护效果的有效策略.不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)<[GD/1/96(H5N1)]>的HA基因(optiHA),并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIopiHA,将含有GD/1/96(H5N1)野生型HA基因的质料pCIHA和pCIoptiHA分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24-48小时293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白;Western-blot证实上述2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,结果表明密码子优化的HA基因体外瞬时表达水平显著高于野生型HA基因.这一结果为进一步开展SPF鸡免疫保护效果的比较研究奠定了基础.
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预试期:在非隔离条件下(原场)进行14日龄(Ⅰ组)和28日龄(Ⅱ组)断奶对比试验,结果表明,21日龄体重Ⅰ组比Ⅱ组低9.44％(P＜0.01),42日龄时体重差异已不显著(P＞0.05);14～56日龄Ⅰ组采食量,每千克增重耗料量分别比Ⅱ组高28.76％和28.57％.正试期:在隔离条件下(新场)对12日龄断奶(SEW)仔猪进行测定,其结果,56日龄体重达14.45 kg,比非隔离的14和28日龄
采用Klein-Defors悬浮杀灭与感染试验方法,研究新型含碘消毒剂在不同浓度下,分别与禽流感H5N1和H9N2亚型病毒作用5分钟、10分钟对禽流感病毒的杀灭作用.结果显示,该含碘消毒剂在1:1600以下的浓度范围内,对病毒的杀灭率可达到99.9﹪以上.虽然该消毒剂有较好的杀毒效果,但在应用中应考虑其影响因素的影响,因此,我们推荐该消毒剂的使用工作浓度为100﹪杀灭病毒的稀释度,即1:1200.
从北京鸭cDNA文库中克隆了鸭MHC class I基因(Anpl-MHC I),并对其等位基因多态性、基因组结构、以及多肽结合区(PBD)的氨基酸置换率和三级结构进行了量化分析.Anpl-MHC I长1,068个核苷酸,编码356个氨基酸;基因组DNA由8个外显子和7个内含子组成.Anpl-MHC I等位基因可分为4个类型(-UA~-UD).在其α1和α2区有28个高置换位点,并存在重组杂合现象
从山东、河南、河北、北京、江苏、广东、广西、四川、吉林、辽宁、台湾11省42个不同鸡群收集临床有发病表现的828只病、死鸡的病理组织样品,用点杂交方法检测各个样品中马立克氏病病毒(MDV)、网状内皮细胞增生病病毒(REV)、鸡传染性贫血病病毒(CAV)的感染情况.结果表明:828只病鸡中这三种病毒的检出率均相当高,分别为83.94﹪(MDV)、61.0﹪(CAV)和57.25﹪(REV),并且存在
对2004年我省禽流感受威胁区的鸡鸭鹅禽流感免疫血清进行了二次抗体监测.在1926份血清中有1732份为阳性,阳性率为89.9﹪.第一次采样在免疫后15~35天,检测出阳性率为90.5﹪;第二次在免疫后45~55天,阳性率为88.2﹪.第一次监测时抗体阳性率和阳性值都高,第二次虽然阳性率仍高,但水禽的阳性值下降了二个滴度.水禽血清中的非特异性凝集素对检测有很大的影响,经采取56℃灭能30分钟后加等
本文对2004年春季在山东省境内分离的10株大肠杆菌(编号为SD1-SD10)进行了血清学鉴定、药敏试验和致病性试验研究.血清型鉴定结果表明,本实验中分离的大肠杆菌共有6种血清型,其中较常见的鸡致病性大肠杆菌血清型有4种,即O2、O35、O78和O88,占分离菌株血清型的70﹪;较少见鸡致病性大肠杆菌血清型有2种,即O138、O147,占分离菌株血清型的30﹪.动物试验结果表明:O138和O147
面对禽流感的肆虐,为满足生产实际需求,从防控角度入手,我们进行了系统的禽流感防控研究.通过对禽流感的临床和实验室诊断、禽流感病毒保护性HI抗体滴度、禽流感母源抗体以及疫苗免疫抗体消长规律的研究,配合疫苗和诊断试剂质量及血清监测中存在的问题制订了禽流感免疫程序.养禽生产中的长期应用表明,本研究制定的免疫程序是切实可行的.
以H5N1亚型禽流感毒株基因组RNA为模板,利用RT-PCR技术,扩增禽流感病毒分离株(H5N1)的NS1基因,得到的基因片段与T载体连接,重组质粒经BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后与载体pET32a连接,转化宿主BL21,IPTG诱导表达目的蛋白.SDS-PAGE及western Blot检测和鉴定结果表明,在大肠杆菌中成功表达了NS1蛋白,分子量约45kDa,且该表达产物可与AIV感染的动物
如微RNA病毒科的其它成员一样,禽脑脊髓炎病毒(AEV)蛋白认为是AEV的主要宿主保护性免疫原.使用反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增出两个AEV分离株3和4株和一株标准鸡胚适应株VP株的VP基因,然后克隆到载体pBluescript SK中,进行序列测定.这三株AEV病毒的VP基因与已发表的AEV活疫苗株1143株和强毒株L2Z株进行比较,表明相互之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为94.
利用纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,以M2融合蛋白和GST分别作为ELISA抗原,对M2融合蛋白抗原检测强阳性、GST抗原检测阴性的杂交瘤细胞进行克隆筛选,制备出4株分泌抗禽流感病毒M2蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株1E1、2F8、4E3和5D2.ELISA结果表明,制备的单抗能与H5、H9亚型AIV发生特异性反应,而不能与鸡新城疫病毒(NDV)和鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)反应.IFA和免