【摘 要】
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PKZ是近年来在鱼中发现的一中新的eIF2α激酶.PKZ的C端是激酶结构域,N端是Z-DNA结构域(Zα).Zα与Z-DNA结合后PKZ能够被激活.Zα包括2个亚型结构域Zα1(Zα)和zα2(zβ).
【出 处】
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第七届湘、鄂、赣、粤、桂五省动物学学术研讨会
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PKZ是近年来在鱼中发现的一中新的eIF2α激酶.PKZ的C端是激酶结构域,N端是Z-DNA结构域(Zα).Zα与Z-DNA结合后PKZ能够被激活.Zα包括2个亚型结构域Zα1(Zα)和zα2(zβ).直到今天PKZ Zα的真正功能依旧未知.为了理解PKZ Zα与DNA构想之间的关系,我们获得Zα1 Zα2,9个点突变体(K34A,N38A,R39A,Y42A,P57A,P58A,W60A,K56A,S35A)和2个替换型的突变体(Zα1Zα1,Zα2Zα2),这些蛋白多肽分别地通过E.coli Rosetta原核表达系统进行表达并通过组氨酸镍离子亲和层析柱纯化.同时不同长度的发卡结构DNA d[(GC)nT4(GC)n](n=2-6)和RNA r[(GC)6T4(GC)6]被合成.圆二色谱和凝胶阻滞分析被用来分析和检测DNA和RNA是否能够形成Z型结构在Zα蛋白的作用下.实验结果显示发卡型的DNA在没有Zα1Zα2情况下形成传统的B型DNA结构,但是当其中的GC序列到达3个或3个以上时能够在Zα1Zα2的作用下形成Z型DNA结构.GC序列越多,这种趋势越加明显.对比野生型Zα1 Zα2,替换型Zα1Zα1同样能够使d[(GC)6T4(GC)6]转变成典型的Z型DNA,然而另一种替换型Zα2Zα2没有表现出这种功能.这种结果进一步表现出Zα1亚型结构域在Z-DNA的转变过程中所发挥的作用远远高于Zα2亚型结构域.另外,突变型K34A,N38A,R39A,Y42A,P57A,P58A和W60A不能够转换d[(GC)6T4(GC)6] DNA成Z型DNA,但是非保守位点的突变体S35A和K56A依旧保留一部分翻转酶的活性.上述的结果都通过了凝胶阻滞分析进行验证.有趣的是在45度的条件下Zα1Zα2能够缓慢地诱导右手A型r[(GC)6T4(GC)6] RNA形成Z型结构RNA.
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