【摘 要】
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目前,多数免疫分析方法只能检测一种或一类结构相似的分析物.为缩短检测时间、降低检测成本、提高检测效率,发展能够同时检测多种或多类分析物的免疫分析方法,对于保障食品安全和人类健康具有重要意义.本研究建立了一种多重荧光偏振免疫分析方法(multi-wavelength fluorescence polarization immunoassay)来同时检测玉米中的三种真菌毒素.通过化学方法将脱氧雪腐镰刀
【机 构】
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北京食品营养与人类健康高精尖创新中心,中国农业大学动物医学院 北京100193 西北农林科技大学动
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医食品卫生学分会第十三次学术交流会
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目前,多数免疫分析方法只能检测一种或一类结构相似的分析物.为缩短检测时间、降低检测成本、提高检测效率,发展能够同时检测多种或多类分析物的免疫分析方法,对于保障食品安全和人类健康具有重要意义.本研究建立了一种多重荧光偏振免疫分析方法(multi-wavelength fluorescence polarization immunoassay)来同时检测玉米中的三种真菌毒素.通过化学方法将脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)、T-2毒素和伏马毒素B1 (FB1)分别与三种具有不同激发和发射波长的荧光素fluoresceinthiocarbamyl ethylenediamine (EDF)、tetramethylrhodamine cadaverine(TRCA)和alexa fluor 647 carboxylic acid succinimidyl ester(AF647)偶联,制备得到荧光标记物DON-HS-EDF、T-2-HS-TRCA和FB1-AF647.将实验室已制备的DON的单克隆抗体3B2、T-2毒素的单克隆抗体9C7、FB1的单克隆抗体4F5,与三种荧光标记物进行组合,建立了可同时检测三种真菌毒素的均相、高通量的荧光偏振免疫分析方法,并对方法的可行性进行了较为系统的研究.玉米样本用40％甲醇溶液进行提取,方法对于DON、T-2毒素和FB1的检测限分别为242.0 μg kg-1、17.8 μg kg-1和331.5 μg kg-1,回收率为76.5-106.3％,变异系数小于21.7％,满足欧盟和美国规定的玉米中三种真菌毒素的最大限量要求.本方法所需检测时间(含样本前处理)少于30分钟.用所建立的方法和液相色谱-串联质谱法对20份自然受污染玉米样本进行检测,两种方法相关性较好,R2为0.97 (DON)和0.99 (FB1).本研究所建立的多重荧光偏振免疫分析方法,具有灵敏、简单和快速的优点,可作为一种通用的方法用于其它分析物的筛选检测.
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