论文部分内容阅读
本研究通过MSTN基因敲除打靶载体的构建与胎儿成纤维细胞基因转染，成功获得了一个MSTN基因敲除细胞系，证实载体构建和细胞转染实验体系成功建立。进一步利用MSTN基因敲除细胞作为核供体，获得基因敲除体细胞克隆囊胚及妊娠母牛，为MSTN基因敲除牛的制备打下良好的实验基础。
制备肌肉生长抑制素(MSTN)基因敲除肉牛的研究
【摘 要】
：
本研究通过MSTN基因敲除打靶载体的构建与胎儿成纤维细胞基因转染，成功获得了一个MSTN基因敲除细胞系，证实载体构建和细胞转染实验体系成功建立。进一步利用MSTN基因敲除细胞作为核供体，获得基因敲除体细胞克隆囊胚及妊娠母牛，为MSTN基因敲除牛的制备打下良好的实验基础。
【机 构】
：
内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室,010021
【出 处】
：
第六次全国动物生物技术学术研讨会
【发表日期】
：
2011年6期
其他文献
为探讨MC4R在牛生长中的精细结构与功能，本研究构建了牛MC4R-GFP融合表达蛋白载体。该研究利用基因克隆和载体构建技术成功构建了融合蛋白表达载体pEGFP-C1-MC4R，经测序比对证实基因序列正确，满足进一步试验要求，为下一步探讨MC4R信号通路奠定了基础。
本文探索了制备乳腺特异表达鲑鱼降钙素转基因山羊的两套方案,一套为随机整合,另一套是利用Cre/loxp系统和共整合有loxp-neo-tk-loxp框架的乳腺特异高表达人溶菌酶转基因山羊成纤维细胞(hLZGEF)的定位整合方案.
本研究构建的乳腺特异性表达载体PGN转染Bcap-37细胞后，转染组在mRNA转录水平和蛋白表达水平均显著高于对照组。同时山羊乳腺直接灌注PGN试验发现灌注组GH含量在转录水平和蛋白表达水平均略高于对照组，但转染组GHR mRNA表达显著高于对照组，结果提示乳腺组织可能通过GHR的高表达提高GH的利用效率，促进乳腺组织的发育和增加奶产量。本研究成功构建了乳腺特异性表达载体PGN，并在体内和体外证实
sfatl基因综合考虑猪和小鼠的密码子使用频率后对其密码子进行了优化，在其阅读框外引入了SalI和NotI等酶切位点，连接至pUC57克隆载体上，经过测序验证载体构建成功，再经过SalI和NotI酶切回收后连接至脂肪特异性表达载体L28上，命名为FAB P4-sfatl-polyA-neo。经酶切，测序鉴定，sfatl脂肪特异性单标记载体构建成功。
通过overlap-PCR方法克隆得到的秦川牛SHH基因全序列与GenBank的序列一致。通过对其蛋白质的跨膜结构、信号肽及亚细胞定位分析表明，牛SHH基因是一个胞外表达的蛋白。在小鼠和人上的研究表明，SHH通过SHH-Ptc-Smo通路来发挥其功能，但牛作为反当动物，其脂肪发育机理与小鼠和人有很大的差异，SHH信号通路在牛脂肪沉积中的作用也有待进一步的探讨，本研究获得秦川牛SHH原核表达产物为进
本文经测序和细胞水平发光情况表明，该双启动子双报告基因真核表达载体构建成功，绿色荧光的表达先于红色荧光的表达，载体较小，易于导入细胞进行功能研究。
目的：构建在哺乳动物细胞中表达的山羊TLR2绿色荧光蛋白融合表达载体.方法：根据克隆到T载体上的山羊TLR2测序结果,设计一对不含终止子的引物,将山羊TLR2 PCR产物连接到pEGFP-NI载体上,用磷酸钙法转染293T细胞,并在荧光显微镜下观察.结果：重组质粒经酶切和测序鉴定正确,且在293T细胞中表达.融合蛋白发出的绿色荧光表明TLR2-EGFP主要分布在细胞膜上.结论：成功构建pEGFP-
本文构建了水牛抑制素基因的干扰片段，希望借助PB载体，通过转基因技术将其导入水牛体内，干扰抑制素的表达以达到提高水牛繁殖力的目的。经过颗粒细胞转染实验也证明，构建的干扰片段表达载体对抑制素的表达起到了一定的抑制作用。同时通过6418筛选获得了一批稳定的阳性细胞，为进行显微注谢技术和核移植技术进行转基因的研究提供了研究材料。
通过分析GFP蛋白在转基因小鼠中的表达，以鉴定TARGATTTM技术在制备定点插入转基因小鼠模型的效率。结果表明，借助整合酶的作用，GFP报告基因定点插入至小鼠基因组特定位点(H11)的效率可高达40％，且能稳定遗传至后代。根据GFP基因表达的荧光强度分析，定点插入的GFP基因能在所有分析的小鼠器官及组织(如肝，心，小脑等)中高效表达。同时，应用具有组织特异性的启动子(如骨髓运动神经元)而建立的组