补肾活血方通过PI3K/AKT通路对蜕膜基质细胞的影响

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目的:将补肾活血作为治疗之法,拟通过补肾活血方干预体外蜕膜基质细胞,探索影响蜕膜基质细胞凋亡及增殖信号通路的相关因子,初步探讨其作用机制,为今后明确不明原因复发性流产发病机制奠定理论基础,同时作为今后中成药剂治疗本病的研究基础。方法:收集10例肾虚血瘀型不明原因复发性流产妊娠失败妇女和10例正常妊娠行人工流产妇女的蜕膜组织,应用分层离心法提取蜕膜基质细胞,建立体外蜕膜基质细胞体系。流式荧光术检测肾虚血瘀型不明原因复发性流产妊娠妇女与正常妊娠妇女蜕膜基质细胞凋亡情况;通过CCK-8探讨补肾活血方含药血清对DSCs增殖活性的影响;通过Real-time PCR方法观察补肾活血方干预蜕膜基质细胞后PI3K/AKT信号通路上相关分子mR NA水平的变化,以此研究补肾活血方对蜕膜基质细胞上PI3K/AKT信号通路的调控机制。结果:1、肾虚血瘀型不明原因复发性流产患者蜕膜基质细胞中早期凋亡细胞的比例高于正常早期妊娠者(p<0.05);2、PI3K抑制剂对DSCs增殖活性的抑制具有浓度依赖性,10u M为适当浓度,与对照组相比具有显著统计学差异(p<0.001);3、5%补肾活血方含药血清+5%空白血清对肾虚血瘀型不明原因复发性流产DSCs增殖活性的促进作用最明显,与10%空白血清组相比有明显统计学差异(p<0.01);补肾活血方含药血清可以消除PI3K抑制剂对DSCs增殖的抑制作用;4、补肾活血方含药血清可以上调肾虚血瘀型不明原因复发性流产蜕膜基质细胞内PI3K、p-AKT、PTEN等分子mR NA水平;5、补肾活血方含药血清可以上调肾虚血瘀型不明原因复发性流产蜕膜基质细胞Bcl-x LmR NA、同时下调BAD mR NA水平。结论:1、补肾活血方含药血清可以通过上调蜕膜基质细胞PI3K/AKT通路分子mR NA水平恢复其增殖活性,从而对肾虚血瘀型不明原因复发性流产起到治疗作用,最终达到补肾活血,养血安胎的目的。2、补肾活血方能够调节肾虚血瘀型不明原因复发性流产蜕膜基质细胞Bcl-x L及BAD基因的异常表达,改善其异常凋亡状态从而有利于维系妊娠及改善妊娠结局。
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