实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测口蹄疫病毒

来源 :第六次人畜共患病学术交流会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhang1118168
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口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的野生、家畜偶蹄动物的一种高度传染性的疾病.快速和可靠的诊断对于FMD的控制至关重要,为采取有效措施,实验室诊断必须在24小时之内作出快速、准确的结论.动物和肉类产品带毒引发口蹄疫是多次大流行的主要原因.对肉食品中低含量的FMD病毒、隐性感染或持续带毒宿主进行准确检测的方法必须具备高敏感性、高特异性.常规的诊断方法如病毒分离、血清学试验、动物试验等,或费时费力,或特异性和敏感性不高,不能满足快速、准确诊断的要求.RT-PCR、竞争PCR和ELISA-PCR方法克服了这些方法的不足,可用于FMD的诊断,但也有费时、易污染、扩增后需电泳检测和每次检测的样品数量少等缺点.近几年发展起来的实时荧光定量RT-PCR将PCR与荧光检测相结合,克服了这些缺点,可对样品中的FMDV进行准确的定性和定量检测,具有简单、易操作、结果直观、敏感性高、特异性强、重复性好等优点,已成为病原体检测的重要方法.本实验应用实时TaqMan RT-PCR对FMDV进行了定性和定量检测研究.
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《红楼梦》第七十六回"凸碧堂品笛感凄清,凹晶馆联诗悲寂寞",史湘云对林黛玉说凹凸二字"不大见用","只有陆放翁用了凹字,说,古砚微凹聚墨多",林黛玉则反驳道:"也不只放翁用,古人中用者太多。如江淹《青苔赋》,东方朔《神异经》,以至《画记》上云,张僧繇画一乘寺的故事,不可胜举。只是今人不知,误作俗字用
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应用RT-PCR技术分别从脂多糖(LPS)活化的山羊脾脏细胞和肺泡巨噬细胞中克隆到编码山羊白细胞介素(IL-)18成熟蛋白的cDNA基因,其大小为480bp.序列分析表明gIL-18与奶牛和绵羊的IL-18基因序列高度同源.将gIL-18克隆到pET-32a(+)质粒载体中,转化大肠杆菌BL21后,IPTG诱导后经SDS-PAGE分析,得到了分子量为38kD的融合蛋白.使用半定量RT-PCR对山羊
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根据GenBank公布的Japanese Encephalitis Virus(JEV)SA14-14-2减毒株的核苷酸序列(GenBank登录号:AF315119),设计并合成一对特异性引物.应用RT-PCR方法扩增出编码JEV囊膜蛋白抗原域Ⅲ的基因(Em),将其克隆入pMD18-T载体,经测序后克隆入原核表达载体pET-32a(+),构建原核表达载体pET-Em.阳性质粒转化BL21(DE3)
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