病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)利用反义遗传学方法,不需要复杂的遗传学转化,可快速便捷地研究目标基因的功能。硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)是叶绿体活性氧清除系统的关键组分,既可以直接与ROS反应将其还原,又可以作为底物参与酶促反应以清除ROS。本研究中通过对VIGS体系的优化,沉默番茄Trx基因家族中的Trxf1,旨在为番茄在抗盐胁迫基因功能验证的研究奠定理论基础。以番茄‘里格尔87-5’为试验材料,采集长至四叶一心时期的番茄叶片,用Trizol法提取总RNA,并反转录为cDNA。根据GenBank中公布的番茄Trxf1基因序列设计特异引物,并在引物上游和下游分别加上EcoRⅠ、XhoⅠ酶切位点,以cDNA第一链为模板进行扩增,经琼脂糖凝胶回收后与表达载体pEASY-Blunt E1进行连接,并转化至E.coli DH5α感受态细胞,经PCR鉴定后进行测序。将验证正确的目的基因提取质粒,与沉默载体TRV2连接转化,经PCR和双酶切验证后进行测序比对。利用Trxf1基因的特异性引物,以番茄cDNA为模板扩增出大约549 bp的片段,经过测序分析确定为番茄Trxf1基因。构建的重组质粒TRV2-Trxf1可以经PCR扩增出目的条带,同时进行双酶切鉴定,得到与载体大小相近的大片段,以及与目的基因大小相等的小片段,说明沉默载体TRV2-Trxf1构建成功,具备后期沉默Trxf1基因进行功能验证的条件。