三疣梭子蟹Met蛋白基因克隆及其在甲基法尼酯调控的卵黄蛋白原转录激活过程中的作用

来源 :第十届世界华人虾蟹养殖研讨会暨2016年中国河蟹产业发展高峰论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mengxianshan
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  萜类激素在节肢动物的生长发育过程中扮演了重要角色,如昆虫中的保幼激素(Juvenile hormone,JH)和甲壳动物中的甲基法尼酯(Methyl famesoate,MF)。但由于大量结合蛋白的存在,JH和MF的核受体蛋白一直未能得到明确鉴定。近年来,抗甲氧普林(Met)蛋白逐渐成为JH和MF受体热门候选蛋白,它隶属于bHLH-PAS核转录调控蛋白家族,具有较高的JH和MF亲和活性。本研究基于课题组的三疣梭子蟹全组织转录组文库中Met相似序列,利用反转录PCR(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增技术(PACE),克隆获得了三疣梭子蟹Met蛋白的全长cDNA序列(PtMet)。该序列全长1757 bp,包含216 bp的5端非编码区、248 bp的3端非编码区和1293 bp的开放阅读框(ORE),编码430个氨基酸。预测的氨基酸的序列包含了bHLH,PAS-A和PAS-B等bHLH-PAS蛋白家族的特征结构域以及一些可与JH或MF结合的保守活性位点。组织表达分析显示PtMet mRNA广泛存在于三疣梭子蟹的各个组织之中,且在雌性三疣梭子蟹肝胰腺中的表达量最高。在卵巢发育过程中,肝胰腺及卵巢中PtMet的相对表达水平均在卵黄发生早期显著上升,这表明Met蛋白可能参与卵黄合成的调控。进一步的实验显示,无论是离体培养或活体注射,MF处理均能促进肝胰腺中PtMet和卵黄蛋白原基因(PtVg)相对表达水平的显著上调。由于肝胰腺是甲壳动物卵黄蛋白原的主要合成组织,我们推测PtMet极有可能作为MF的受体参与肝胰腺中MF诱导的Vg转录激活过程。而在卵巢中,虽然离体培养添加MF对PtMet和PtVg的表达水平并无影响,但活体注射实验却发现MF处理能够刺激PtMet的表达水平在实验第6d显著上升,对PtVg却并无影响。由于MF注射组梭子蟹在实验第6d仍处于前卵黄发生期,我们猜测卵巢中PtMet对MF的转录响应可能存在时期特异性,且对卵巢中Vg的转录激活并无影响。
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会议
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