【摘 要】
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目的：开发两种UPLC(R)方法 —SE-UPLC和RP-UPLC,用于分析蛋白PEG修饰过程中的PEG-蛋白偶联物、非PEG化蛋白以及游离活化PEG水平。方法：采用SEC(SE-UPLC)和RPC(RP-UPLC)两种UPLC配置评估了50 KDa分子量的蛋白、40 KDa的活化PEG(aPEG)以及偶联物这三种物质的分离,两种方法均易于建立,且能够完全兼容蒸发光散射检测器(ELSD)。结果：在
【机 构】
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目的：开发两种UPLC(R)方法 —SE-UPLC和RP-UPLC,用于分析蛋白PEG修饰过程中的PEG-蛋白偶联物、非PEG化蛋白以及游离活化PEG水平。方法：采用SEC(SE-UPLC)和RPC(RP-UPLC)两种UPLC配置评估了50 KDa分子量的蛋白、40 KDa的活化PEG(aPEG)以及偶联物这三种物质的分离,两种方法均易于建立,且能够完全兼容蒸发光散射检测器(ELSD)。结果：在非PEG修饰蛋白、aPEG以及偶联物的Rh值有明显差异的情况下,SE-UPLC能够快速分析蛋白PEG修饰反应的产物以及未反应的组分。根据蛋白和PEG分子量组合的预测Rh值可知,在许多情况下SE-UPLC都无法提供分析三种组分所必须达到的分离程度。本文的结果证实了这一结论—该模型准确地预测出40 KDa PEG和50 KDa PEG修饰蛋白的Rh值差异不够显著,因而无法通过SE-UPLC进行分离。但是,在许多情况下,SE-UPLC仍可用于分离样品中经过修饰以及未修饰的组分,尤其是使用大分子量PEG(20和40 KDa)修饰的样品。结论：通过比较,我们发现对于本文所述的这一具体应用,可以基于三种组分的疏水性差异,使用300(A)BEH色谱柱在高温条件下(90℃)实现充分的分离。此外,还可通过串联使用紫外检测器和ELSD检测器对三种组分进行定量。
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