肺炎与鹦鹉热嗜衣原体临床株的分离鉴定及小鼠呼吸道感染模型的建立

来源 :2010中国人兽共患病学术交流会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nemosan
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肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae,C.pneumoniae,Cpn)及鹦鹉热嗜衣原体(Chlamydophila psittaci,C.psittaci,Cps)是严格细胞内寄生,具有独特发育周期的人兽共患的原核微生物,主要引起呼吸道尤其是肺部感染,并在世界各地广泛流行.为了优化Cpn、Cps临床株的分离培养的关键技术及敏感细胞;建立Cpn及Cps呼吸道感染的动物模型.本研究从患者呼吸道及禽鸟肝组织采集标本,抽提总DNA,PCR法体外扩增种Cpn、Cps ompA基因,经进一步酶切、测序初步鉴定Cpn、Cps阳性标本;同时将阳性标本接种到Hep-2和Vero细胞中培养,通过多次亚培养与传代,感染的单层细胞用甲醇固定,Giemsa和免疫荧光染色法鉴定衣原体包涵体;将临床株扩大培养后,用2×104、2× 105、2×106IFU三个剂量鼻内接种小鼠,分别于感染后5d和10d处死小鼠,显微镜观察受染小鼠各脏器病理变化.结果显示:采用PCR技术从患者呼吸道标本中检测到Cpn阳性标本15例,禽鸟标本中检测到cps阳性标本6例;并成功地在Hep-2及、vero细胞中培养出2株CPn及3株Cps床分离株;发现Hep-2及、Vero细胞内的Cpn. Cps包涵体数目较多,结构致密,连续传代中更稳定,对衣原体感染引起的宿主细胞溶解耐受性较强,更适合用于Cpn, Cps.的分离培养及体外研究。
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