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为制备禽白血病病毒(ALV)核衣壳蛋白p27的单克隆抗体，本研究以原核表达的融合蛋白GST-ALVD27免疫小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0进行融合，通过IFA和间接ELISA方法进行筛选，获得了五株单克隆抗体，分别为5D3、4F12、5810、1C5和3C6，亚类鉴定3C6为IgG2b(kappa链)，其余为IgGl(Kappa链)。通过IFA、westem-blot及竞争抑制ELISA试验，表明该五株单抗与禽白血病病毒(ALV-J)呈阳性反应，而与其他常见禽源病毒无交叉反应。利用5D3和4F12单抗建立了双抗体夹心ELISA方法，经临床样本验证，该方法与商品化试剂盒的符合率达到97．5％以上，证明所获得的针对ALV p27蛋白的单抗及建立的双抗体ELISA方法具有较高的应用价值。