【摘 要】
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目的：体外观察白芷活性提取物对人皮肤角质形成细胞(keratinocytcs,KC)生物学特性的影响,初步探讨其促进创面愈合的可能机制。方法：取人源性皮肤KC的HaCaT细胞株,复苏培养选用第5代细胞进行实验。取白芷生药95％乙醇提取后,将白芷活性提取物溶解于含0.25％胎牛血清的DMEM培养液中,稀释至5×l0-2、5×10-3、5×10-4、5×10-5 g/L,分别与KC培养5d后采用MTT
【机 构】
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Burn Center of PLA, Xijing Hospital, the Fourth Military Medical University, Xi'an 710032, P.R.Chin
【出 处】
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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会
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目的：体外观察白芷活性提取物对人皮肤角质形成细胞(keratinocytcs,KC)生物学特性的影响,初步探讨其促进创面愈合的可能机制。方法：取人源性皮肤KC的HaCaT细胞株,复苏培养选用第5代细胞进行实验。取白芷生药95％乙醇提取后,将白芷活性提取物溶解于含0.25％胎牛血清的DMEM培养液中,稀释至5×l0-2、5×10-3、5×10-4、5×10-5 g/L,分别与KC培养5d后采用MTT法测定细胞增殖活性,以0.25％胎牛血清DMEM培养作为对照。根据细胞增殖活性确定最佳浓度后,取KC分别采用最佳浓度白芷提取液(实验组)及0.25％胎牛血清DMEM(对照组)培养。培养5d流式细胞仪测定两组细胞周期,48 h后实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞周期相关基因细胞周期素D1(cyclin D1)、凋亡相关基因天冬氨酸半胱氨酸酶3(Caspase-3) mRNA的表达。结果：培养5d后,MTT测定5×10-4、5×10-3、5×10-2g/L浓度可促进KC增殖,吸光度(A)值与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05)；其中5× 10-3g/L浓度组A值最高,确定为最佳浓度.实验组S期及G2/M期细胞较对照组明显增多,G0/G1期细胞明显减少,差异均有统计学意义(P＜0.05)。实验组cyclin D1 mRNA相对表达量为0.400±0.024,低于对照组的1.000±0.028,差异有统计学意义(t=12.73,P=0.000 ＜0.01)。实验组Caspase-3 mRNA相对表达量为0.814±0.054,低于对照组的1.000±0.043,差异有统计学意义(t=3.353,P=0.028)。结论：白芷活性提取物能显著促进KC增殖,下调cyclin D1的表达加快细胞周期进程,同时下调Caspase-3 mRNA的表达抑制细胞凋亡,可望加快上皮化进程促进创面愈合。
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