论文部分内容阅读
目的：通过研究NAFLD不同阶段KC的活化、功能改变及其TLR4信号的激活情况,以及复方楂金颗粒对KC的活化、功能改变及其TLR4信号影响,阐明NAFL炎症启动的可能分子机制以及复方楂金颗粒作用机制.方法：6周龄雄性TLR4+/+小鼠和TLR4mut/mut小鼠各50只,每组按体重分到高脂组(30只)和对照组(20只).高脂组用高脂饲料和20％果糖饮用水喂养；对照组用普通饲料和普通饮用水喂养.于第8周每组分别处死10只小鼠,8周后将高脂组按体重分为高脂组和楂金颗粒组各10只,楂金颗粒组用高脂饲料和20％果糖饮用水喂养,每天予以50ml/kg 12.8％的复方楂金颗粒冲剂灌胃.其余各组喂养如前,每天与同体积蒸馏水灌胃,16周处死所有小鼠.检测体重、肝湿重、肝功能及脂代谢等NASH相关指标,肝组织HE、油红O及Masson染色评价病理学改变.免疫双荧光标记检测CD68和F4/80的表达,用免疫组织化学染色和RT-PCR法检测小鼠肝组织TLR4、MyD88蛋白和TLR4、MyD88、TNF-α的mRNA表达；观察复方楂金颗粒剂对肝脏内Kupffer细胞活化及TLR4信号通路的影响.结果：与同时点对照组比较,TLR4wt和TLR4mut小鼠的高脂高果糖组体重、肝湿重增加,TLR4wt小鼠的高脂高果糖组油红O染色面积、密度增加,HE染色显示随造模时间延长出现不同程度脂肪变伴炎症灶,高脂高果糖组变化更明显,造模结束时80％达到NASH诊断标准(NAS≥5),伴明显气球样变和轻度窦周纤维化,Masson染色阳性.TLR4wt小鼠复方楂金颗粒治疗组油红O染色面积、密度较未治疗组减少,HE染色显示炎症气球样变较未治疗组减少,Masson染色阴性.血清检测显示：8周末,TLR4wt小鼠的高脂高果糖组ALT、AST、总胆固醇较对照组上升,差异无统计学意义(P＞0.05)；16周末,TLR4wt小鼠的高脂高果糖组ALT、AST增加明显(P＜0.05),TLR4wt小鼠复方楂金颗粒治疗组ALT、AST明显低于为治疗组(P＜0.05).TLR4mut小鼠的高脂高果糖组及其复方楂金颗粒治疗组造模各时间点肝组织病理学、血清学与其对照组比较改变均不明显.结论：①高脂高果糖饮食能建立良好再现人类NASH的自然病程的小鼠模型；②高脂高果糖饮食不能诱导TLR4基因突变小鼠NASH的发生；③复方楂金颗粒剂能减轻小鼠肝脏内脂质沉积、炎症和纤维化,具有防治NASH作用；④复方楂金颗粒剂能明显抑制NASH小鼠肝脏内Kupffer细胞的活化；⑤复方楂金颗粒剂能明显抑制NASH小鼠肝组织内TLR4信号通路；