肝癌诊断标志物高尔基体蛋白73基因在大肠杆菌中的表达

来源 :第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qiyanru
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  目的:克隆、表达和鉴定肝癌诊断标志物高尔基体蛋白73基因序列(1028-1327bp),为抗体的制备及相应检测试剂的研制打下基础。方法:将GP73蛋白基因克隆到表达载体PGEX—4T-2上,构建了重组表达质粒PGEX-4T-2/GP73,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,利用GST亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western blot和ELISA方法检测其抗原性,并与商品化的GP73抗原进行比较。结果:重组蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子量为37kD,与预计大小一致。Wlestern blot和ELISA实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论:本研究成功克隆和表达了高尔基体蛋白73序列,为制备抗体和肝癌诊断试剂的研发究奠定了基础。
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