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海参是我国传统的名贵滋补品,具有很高的食用及药用价值。海参多糖具有抗凝血、抗肿瘤、抗病毒、降血脂、促进干细胞增殖及促进伤口愈合等活性,是药物开发的良好原料。海参煮液废水常常被排放,不仅造成了多糖资源的浪费,也加重了环境污染。本文以海参(Apostichopus japonicus Selenka)煮液为研究对象,通过醇沉和酶解方法得到海参粗多糖HSM。对HSM采用Q-Sepharose FF阴离子交换层析和Sephacryl S-300凝胶层析方法进行分离纯化,得到了HSMA、HSMB、HSMC1、HSMC2和HSMD共5种纯化多糖组分,得率分别为1.8%、3.8%、31.8%、31.1%和13.2%。进一步对其进行了基本理化性质测定。结果表明,其硫酸根含量分别为9.7%、12.8%、23.0%、18.7%和25.7%。采用高效凝胶渗透色谱-多角度激光散射法测定其分子量分别为1212 k Da、195 k Da、627 k Da、246 k Da和399 k Da。经PMP柱前衍生高效液相色谱法分析表明,组分HSMA、HSMB和HSMC2主要由甘露糖和葡萄糖组成,甘露糖含量分别为55.9%、42.3%和49.7%,HSMC1和HSMD主要由岩藻糖组成,含量分别为73.2%和88.3%。采用红外光谱(IR)和核磁共振波谱(NMR)对HSMC1和HSMD的化学结构进行了分析,初步确定二者结构中主要含有4-硫酸化岩藻糖(Fuc4S),及少量2-硫酸化岩藻糖(Fuc2S)和2,4-二硫酸化岩藻糖(Fuc24S)。以肝素为阳性对照,选用活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT)作为指标,测定各组分在15、75、150μg/m L三个浓度下的抗凝活性。实验结果表明,各组分可有效延长APTT值,且在极低的浓度(15μg/m L)下抗凝活性均高于肝素。其中,HS-C1的抗凝活性最好并表现出明显的剂量依赖性,即随样品浓度的增加,其抗凝活性也随之增加。说明海参煮液多糖样品可能只影响内源性凝血途径,对外源性凝血途径无作用。该研究结果为海参多糖进一步构效关系研究以及新型抗凝药物的开发提供了依据。