【摘 要】
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近年来,在全国范围广泛流行并且引起巨大经济损失的"猪无名高热"的主要病源之一为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。为了便于对PRRSV进行反向遗传探作,本研究根据PRRSV基因组
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心,动物传染病防治研究室,农业部动物寄生虫病重点实验室,上海,200232
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会
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近年来,在全国范围广泛流行并且引起巨大经济损失的"猪无名高热"的主要病源之一为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。为了便于对PRRSV进行反向遗传探作,本研究根据PRRSV基因组序列设计特异性引物,分五段扩增,将得到的片段克隆到pBlueScript ⅡSK(+)载体中,并且利用相关的重叠区酶切位点。将其构建成为全长克隆.在扩增5端时,运用5RACE获得了基因组5最末端序列,在亚克隆入pBlueScript ⅡSK(+)并且在5端上游引入T7启动子序列.选取一个克隆在3端ORF6下游引入MluⅠ位点。以期作为感染性分子克隆的筛选标志。最终获得了含有PRRSV JX0612株基因组全长cDNA的重组质粒pJX0612和含有分子标志Mlu Ⅰ的基因组全长 cDNA克隆pJX0612-M.转染MARG-145细胞后得到拯救病毒,而且分子标志稳定存在。本研究中构建的基因组全长感染性cDNA克隆为探寻病毒基因组结构和功能奠定了基础。
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