【摘 要】
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枯草芽孢杆菌是重要的工业酶蛋白表达系统之一,具有分泌表达、无致病性、发酵技术成熟等优势,在酶制剂生产上得到广泛应用.但由于其对不同外源基因表达量差异大、外源蛋白表
【机 构】
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中国科学院天津工业生物技术研究所300308
【出 处】
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2015中国酶工程与糖生物工程学术研讨会
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枯草芽孢杆菌是重要的工业酶蛋白表达系统之一,具有分泌表达、无致病性、发酵技术成熟等优势,在酶制剂生产上得到广泛应用.但由于其对不同外源基因表达量差异大、外源蛋白表达不稳定、重组质粒稳定性差等缺点,限制了其作为蛋白表达系统的主力宿主.有鉴于此,本研究针对枯草芽胞杆菌系统高效表达元件严重匮乏、遗传转化效率低和蛋白稳定性差等问题,对现有枯草芽孢杆菌表达载体和菌株进行了改造:筛选可用于枯草芽胞杆菌的强启动子,构建具有强转录活性的启动子;构建枯草芽孢杆菌信号肽文库,提高分泌效率;敲除枯草芽孢杆菌中蛋白酶等基因,减少胞外蛋白酶的分泌,提高目的蛋白在发酵液中的稳定性.因此从基因转录、翻译、分泌、稳定性等方面提高酶蛋白的表达量,构建出一套能够高效分泌工业酶的枯草芽孢杆菌蛋白表达系统,是目前较为全面的芽孢杆菌表达平台.分泌表达异源蛋白,如异构酶等,分泌量在＞2g/L,具有很好的工业应用前景.
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