【摘 要】
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将CDV H基因表达盒克隆入转移质粒pVAXΔE3,构建含CDV H基因表达盒的转移质粒pVAXΔE3LPH,用Nru I和Sal I分别酶切转移质粒pVAXΔE3LPH和犬2型腺病毒全基因组质粒pPoly2-CAV-2,将CDV H基因表达盒定向克隆入pPoly2-CAV-2质粒中,构建E3区部分缺失的包含CDV H基因表达盒的犬2型腺病毒重组质粒pCAV-2/CDVLPH.Asc I和Cla
【机 构】
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军事医学科学院军事兽医研究所(吉林长春);山西农业大学动物科技学院(山西太谷) 军事医学科学院军事
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将CDV H基因表达盒克隆入转移质粒pVAXΔE3,构建含CDV H基因表达盒的转移质粒pVAXΔE3LPH,用Nru I和Sal I分别酶切转移质粒pVAXΔE3LPH和犬2型腺病毒全基因组质粒pPoly2-CAV-2,将CDV H基因表达盒定向克隆入pPoly2-CAV-2质粒中,构建E3区部分缺失的包含CDV H基因表达盒的犬2型腺病毒重组质粒pCAV-2/CDVLPH.Asc I和Cla I对pCAV-2/CDVLPH进行双酶切,释放CAV-2/CDVLPH重组基因组,利用脂质体将CAV-2/CDVLPH重组基因组与去除Sal I和Nru I片段的CAV-2基因组两端片段共转染DK细胞,盲传和重复转染3次,4d后出现典型CAV-2病变,获得重组病毒CAV-2/CDVLPH.用CDV H基因特异性引物经RT-PCR扩增重组病毒DK细胞培养物,能够扩增出相应的核酸片段,表明CAV-2/CDVLPH在DK细胞繁殖的过程中能够转录CDVLP H的mRNA,重组病毒免疫犬,可以诱导犬产生特异的抗CAV-2 HI抗体和抗CDV中和抗体.
其他文献
本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的核蛋白(NP)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1亚型SIV的NP基因核甘酸全长为1565bp,共编码498个氨基酸.经同源性比较结果中知,除SW/HLJ/395/01外,其余14株H1N1亚型SIV的NP基因核苷酸序列与参考毒株SW/BJ/94/91保持相对最高的同源性,核苷酸和
对1998-2002年间在河南省豫北地区分离到的5株HN亚型禽流感病毒的抗原性变化进行了比较和分析.经HI试验、鸡胚中和试验、细胞中和试验、攻毒保护试验,结果显示:98-02年5株HN亚型间已经发生了抗原性漂移.98A5和99S毒株间的保护力接近100﹪,在HI、鸡胚中和、细胞中和试验结果的相关性均在0.74以上,表明两毒株间的抗原性相近.2000年以后,毒株变化加大;用OOY攻1998年-200
用DNA疫苗进行接种是一种新的免疫方法,已经被广泛应用于包括口蹄疫在内的多个传染病防治研究中.DNA质粒能同时诱导细胞免疫和体液免疫,激发机体产生抗原特异性CTL和保护性中和抗体.但目前核酸疫苗的免疫效果尚不及常规苗.为提高基因疫苗的免疫应答水平,许多研究者尝试将免疫调节因子与含有病原保护性抗原的质粒共同免疫,或者将二者克隆到同一载体之中,取得了较好的实验结果.本实验室前期研究已经证实,作为候选新
应用Dot—ELISA法对西宁市某饲料厂成品饲料100份,鱼粉85份和精蛋白50份进行了沙门氏菌的检测,同时采用常规分离培养鉴定技术作为对照试验.结果在100份成品饲料,85份鱼粉和50份精蛋白中,Dot—ELISA法检出沙门氏菌阳性分别为43份,65份和33份;阳性率分别为43.00﹪(43/100),75.29﹪(64/85)和66.00﹪(33/50);而常规分离鉴定技术检出沙门氏菌阳性分别
用限制性内切酶SacI和BamHI双酶切克隆有鸡致病性大肠杆菌分离株O、O和O的piliA基因的质粒pTFimO1、pTFimO2和pTFimO78,分别回收从此3质粒上切下的545bp的piliA基因片段,再将载体pET-28a(+)用SacI和BamHI双酶切,最后将pET-28a(+)DNA片段与545bp的piliA DNA片段进行连接,转化至受体菌BL21(DE3)中,经SacI和Bam
为临床能快速诊断虎源流感,通过对本室分离获得的4株虎源流感病毒的HA和NA基因序列分析,结合GenBank中报道的A型流感病毒HA、NA、NP序列,选择保守序列区作为扩增区域.利用Primer5.0软件设计出各个基因的特异性引物,扩增片段大小分别为581bp、173bp、464bp.首先建立三个基因各自的单项RT-PCR检测方法,并用琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶酶切和PCR产物回收纯化后DNA序列
将本实验室分离、鉴定并纯化的虎源HN流感病毒(TIV)接种鸡胚尿囊腔,收获鸡胚尿囊液和羊水.将该病毒尿囊液10倍倍比稀释至10,乙醚麻醉后每个稀释度接种小鼠10只.通过记录各组小鼠死亡数、观察临床症状、测量体重变化、观察病理变化、血液学分析、HI抗体检测及病毒分离鉴定等指标来评价TIV对小鼠的感染性,并计算TIV对小鼠的半数致死量.结果显示:1.发病和死亡小鼠均表现精神沉郁、被毛逆立、眼睛有粘性分
猴痘又称猴天花,与人的天花是近亲,通常发生在非洲热带草原.这种疾病正在美国扩散,引起了政府的高度重视.如此病得不到有效控制,不仅那些买卖外来宠物的人受到威胁,美国全国的公共卫生也会遭到威胁.美国公共卫生人员正在积极进行研究,严防猴痘大规模传染.
禽流感的易感动物为家禽及野禽,也可以感染人及其它哺乳动物.水禽易感性稍差,而且水禽感染禽流感病毒以后,多数是隐性感染,是禽流感病毒的携带者和传播者.本试验从发生疑似禽流感病的鹅群分离到一株病毒,经初步的鉴定为禽流感病毒.
流感病毒是正黏病毒科的重要成员,可感染人和多种动物,危害十分严重.自1878年在意大利发生以来,已有100多年的历史,每隔一定的时间就会在世界不同地区发生.进入20世纪80年代以来,高致病性禽流感的发生频率有所增多,造成的危害更为严重.自2003年2月底,荷兰、比利时、德国和韩国相继暴发高致病性禽流感,特别是2004年初开始在亚洲多个国家暴发的HN血清亚型的高致病性禽流感,传播快、范围广,已经成为