【摘 要】
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用DNA疫苗进行接种是一种新的免疫方法,已经被广泛应用于包括口蹄疫在内的多个传染病防治研究中.DNA质粒能同时诱导细胞免疫和体液免疫,激发机体产生抗原特异性CTL和保护性中和抗体.但目前核酸疫苗的免疫效果尚不及常规苗.为提高基因疫苗的免疫应答水平,许多研究者尝试将免疫调节因子与含有病原保护性抗原的质粒共同免疫,或者将二者克隆到同一载体之中,取得了较好的实验结果.本实验室前期研究已经证实,作为候选新
【机 构】
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云南农业大学(云南昆明) 解放军基因工程重点实验室(吉林长春)
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用DNA疫苗进行接种是一种新的免疫方法,已经被广泛应用于包括口蹄疫在内的多个传染病防治研究中.DNA质粒能同时诱导细胞免疫和体液免疫,激发机体产生抗原特异性CTL和保护性中和抗体.但目前核酸疫苗的免疫效果尚不及常规苗.为提高基因疫苗的免疫应答水平,许多研究者尝试将免疫调节因子与含有病原保护性抗原的质粒共同免疫,或者将二者克隆到同一载体之中,取得了较好的实验结果.本实验室前期研究已经证实,作为候选新型疫苗的核酸疫苗质粒pVAX1-OAT免疫小鼠后能诱导机体产生特异性细胞免疫和体液免疫.本研究主要通过将IL-18以不同方式与DNA质粒pVAX1-OAT联合免疫小鼠,以了解IL-18对基因免疫的作用.
其他文献
采RT-PCR方法对两株O型口蹄疫病毒的VP1基因进行了扩增和序列测定,结果表明两毒株VP1基因均为639bp,编码213个氨基酸.序列比较显示两毒株具有较大的基因差异,分别属于Cathay和ME-SA拓扑型.进一步将两毒株VP1基因分别亚克隆到原核表达载体pET-Trx中,构建重组质粒pETVP14和pETVP116,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG诱导.重组菌菌体裂解物SDS-PA
本试验以犬2型腺病毒全基因组重组质粒pPolyⅡ-CAV-2及其E3区重组质粒pVAX-E3为基础,通过Dra Ⅲ和Ssp Ⅰ双酶切,缺失25097bp-26141bp共1044bpE3区片段,按与编码链相同转录方向插入由CMV启动子、狂犬病病毒SRV9株糖蛋白基因、SV40 polyA构成的总长2424bp的表达盒,获得重组基因组质粒pPoly Ⅱ-CAV-2-CGS(34.7kb).以Asc
本试验以SspI酶切进行犬2型腺病毒全基因组E3区部分缺失,并插入由CMV启动子、狂犬病病毒SRV9株核蛋白、牛生长激素polyA构成的长2.4kb的表达盒.经AscI和PvuI双酶切游离重组全基因组,转染MDCK细胞,得到重组犬2型腺病毒.Western bloting检测表明,狂犬病病毒核蛋白在重组犬2型腺病毒中得到了表达.初步免疫试验显示,重组病毒可以诱导受试犬产生针对犬2型腺病毒和狂犬病病
基于目前FMD疫苗研究的现状及发展趋势,在详尽了解口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth disease virus,FMDV)分子结构及其生物功能,分析病毒抑制宿主免疫应答的分子成分,及激活宿主免疫细胞产生保护性免疫应答(中和抗体和CTL)的分子基础上,本研究提出以O型和A型FMDV主要结构蛋白VP1基因为基础,以非结构蛋白3ABC及结构蛋白VP4上的Th2细胞表位为辅助基因,将以上三个基因串
表达P36基因的重组菌BL21(6P-1-P36)经诱导表达,超声波裂解后高速离心,分别收集上清和沉淀.可溶性表达产物亲和层析纯化后用于检测;同时,用GST-P36包涵体沉淀腹腔注射免疫BALB/c小鼠(400μg/只).利用淋巴细胞杂交瘤技术,获得了一株能分泌特异性抗体的单克隆细胞株5A7-2.生物学特性鉴定表明,腹水单抗的间接ELISA效价为1:2.5×10;免疫球蛋白亚类为IgG.免疫印迹结
免疫原基因的密码子优化是提高DNA疫苗免疫保护效果的有效策略.鸡与哺乳动物细胞在蛋白翻译过程中具有相同的密码子编嗜性,但与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR法及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的HA基因(optiHA),并将其插入CMV启动子表达
以AIV H9亚型油乳剂灭活疫苗作为免疫原,免疫8wk BALB/c小鼠.采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗AIV H9亚型血凝素蛋白的mAb;采用ELISA和血凝抑制试验(HI)检测腹水mAb的效价;采用ELISA、HI、免疫荧光染色(IF)及Western-blot鉴定mAb的特异性.获得3株可稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株2A3、2H1和1C8,其腹水mAb的效价依次为1×10、1×10和5×
本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的神经氨酸酶(NA)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1亚型SIV的NA基因核甘酸全长为1458bp,共编码477个氨基酸.15株H1N1亚型SIV的NA蛋白在58、63、68、88、146位都存在糖基化位点;但是,SW/GD/714/01和SW/GD/771/01在50位存在一糖基
本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的核蛋白(NP)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1亚型SIV的NP基因核甘酸全长为1565bp,共编码498个氨基酸.经同源性比较结果中知,除SW/HLJ/395/01外,其余14株H1N1亚型SIV的NP基因核苷酸序列与参考毒株SW/BJ/94/91保持相对最高的同源性,核苷酸和
对1998-2002年间在河南省豫北地区分离到的5株HN亚型禽流感病毒的抗原性变化进行了比较和分析.经HI试验、鸡胚中和试验、细胞中和试验、攻毒保护试验,结果显示:98-02年5株HN亚型间已经发生了抗原性漂移.98A5和99S毒株间的保护力接近100﹪,在HI、鸡胚中和、细胞中和试验结果的相关性均在0.74以上,表明两毒株间的抗原性相近.2000年以后,毒株变化加大;用OOY攻1998年-200