【摘 要】
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背景：内毒素休克是临床常见的急危重症,可诱发多脏器功能障碍,其中肾脏是其易受侵袭器官之一.内毒素休克诱发急性肾损伤的死亡率可高达70％,因此探索有效的防治措施来改善其预后具有重要意义.前期研究表明,电针刺激足三里和肾俞穴可上调HO-1表达从而减轻兔内毒素休克诱发急性肾损伤,但其涉及的具体信号通路尚不清楚.磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B通路是细胞内重要的信号转导通路,通过影响下游多个靶点可发挥抑制
【出 处】
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中国中西医结合麻醉学会年会暨第二届全国中西医结合麻醉学术研讨会
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背景：内毒素休克是临床常见的急危重症,可诱发多脏器功能障碍,其中肾脏是其易受侵袭器官之一.内毒素休克诱发急性肾损伤的死亡率可高达70％,因此探索有效的防治措施来改善其预后具有重要意义.前期研究表明,电针刺激足三里和肾俞穴可上调HO-1表达从而减轻兔内毒素休克诱发急性肾损伤,但其涉及的具体信号通路尚不清楚.磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B通路是细胞内重要的信号转导通路,通过影响下游多个靶点可发挥抑制凋亡,促进增殖的作用.研究表明,PI3K/Akt可介导核因子E2相关因子2(Nrf2)磷酸化,使其与Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keapl)解离,促使其核转位,识别并结合抗氧化反应元件(ARE),从而调控HO-1的表达.Nrf2/HO-1通路已被证实为细胞内重要的抗氧化应激通路,可发挥对肾脏的保护作用.至于PI3K/AKt是否参与电针刺减轻兔内毒素休克诱发急性肾损伤的作用及其与Nrf2/HO-1通路的关系,目前国内外尚无相关报道.方法：本研究以耳缘静脉注射LPS(5mg/Kg)的方法制备兔内毒素休克诱发急性肾损伤模型.60只健康清洁级新西兰雄性大白兔,2月龄,体重1.5-2.0 Kg,采取随机数字表法,将其随机分为6组(n=10)：电针刺激穴位+渥曼青霉素+AKI组(ELW组)、渥曼青霉素组(W)、空白对照组(C组)、电针刺激穴位+AKI组(EL组)、电针刺激非穴位+AKI组(SEL组)、内毒素休克诱发急性肾损伤组(AKI组).采用HANS G6805-1A低频电子脉冲治疗仪进行电针刺激,针刺参数为：模型制备前l～4d及模型制备过程中电针刺激双侧足三里和内关穴,疏密波,频率2/15Hz,刺激电流≤1.0mA,波宽0.2～0.6ms,1次/d,15min/次,刺激强度以兔肢体出现与电针频率一致的轻微肌颤动为宜.SEL组电针刺激足三里和内关穴旁开0.5cm非经非穴处,针刺参数同EL组.ELW组、EL组、SEL组及AKI组耳缘静脉缓慢注射LPS 5mg/kg(溶于0.5ml 0.9％生理盐水),C组及W组给予等容量的生理盐水.于模型制备前30min,ELW组静脉注射渥曼青霉素0.6mg/kg(溶于0.08ml/kg 0.1％二甲基亚砜),W组给予等量渥曼青霉素.静脉注射LPS或生理盐水6h时,采集动脉血样和尿液标本,检测血浆BUN、Cr及尿NAG浓度,采用放血法处死动物后取肾组织,进行病理学观察及肾损伤评分,测定肾组织SOD活性及MDA含量,检测肾组织p-Akt蛋白、HO-1蛋白、Nrf2核蛋白及总蛋白表达水平,免疫荧光技术测定细胞核内Nrf2蛋白的分布比率.结果：与C组比较,ELW组、EL组、SEL组及AKI组血浆BUN、Cr及尿NAG浓度升高,肾组织MDA含量升高,而SOD活性降低,肾组织损伤评分升高,p-Akt蛋白、HO-1蛋白、Nrf2核蛋白及总蛋白表达水平均上调,且细胞核内Nrf2蛋白的分布比率明显增加(P＜0.05),W组上述各项指标差异无统计学意义(P＞0.05)；与AKI组比较,EL组血浆BUN、Cr及尿NAG浓度降低,肾组织MDA含量降低,而SOD活性升高,肾组织损伤评分降低,p-Akt蛋白、HO-1蛋白、Nrf2核蛋白及总蛋白表达水平均上调,且细胞核内Nrf2蛋白的分布比率明显增加(P＜0.05),SEL组上述各项指标差异无统计学意义(P＞0.05)；与EL组比较,ELW组血浆BUN、Cr及尿NAG浓度升高,肾组织MDA含量升高,SOD活性降低,肾组织损伤评分升高,p-Akt蛋白表达下调(P＜0.05),而HO-1蛋白、Nrf2核蛋白及总蛋白表达水平差异无统计学意义,且细胞核内Nrf2蛋白的分布比率无明显改变(P＞0.05).结论：电针刺激双侧足三里和内关穴可减轻兔内毒素休克诱发急性肾损伤,其机制可能与激活PI3K/Akt/Nrf2通路,上调HO-1表达有关.
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