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[目的]通过原核表达纯化获得肺炎链球菌溶血素(PLY)体外重组蛋白,建立PLY感染A549细胞模型和小鼠鼻内肺炎球菌感染模型,对筛选到的药物进行体内外活性评价,并对其作用机制进行探究。[方法]通过PLY重组蛋白溶血活性抑制试验进行天然化合物筛选。体外实验中,通过乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测鼠尾草酸对A549细胞的毒性;进一步利用A549细胞损伤抑制试验测定经鼠尾草酸预处理后PLY介导的A549细胞LDH释放水平,并通过Live/Dead活死细胞染色进行免疫荧光观察验证上述结果。体内试验中,建立肺炎链球菌D39小鼠鼻内感染模型,并通过皮下注射鼠尾草酸(50 mg/kg体重,间隔12h给药,连用两天)进行治疗,统计感染后96 h内小鼠的存活率;通过肺脏组织湿/干重比和ELISA法检测支气管肺泡灌洗液中干扰素γ(IFN-γ)和白介素-6 (IL-6)的释放量,评价鼠尾草酸对肺组织病理损伤的缓解作用。通过PLY寡聚化抑制试验和蛋白免疫印迹试验分析鼠尾草酸对PLY寡聚化和蛋白表达水平的影响。[结果]筛选到的天然化合物鼠尾草酸在体外较低浓度下(4μg/ml)显著抑制PLY介导的溶血活性,且该抑制活性呈剂量依赖性。细胞试验表明,在有效浓度范围内鼠尾草酸无细胞毒性;PLY经鼠尾草酸预处理后细胞损伤程度显著降低。体内试验中,经鼠尾草酸治疗后肺炎链球菌感染小鼠存活率达40%;肺脏组织湿/干重比值显著降低且支气管肺泡灌洗液中细胞因子IL-6和IFN-γ的释放量显著降低,表明鼠尾草酸显著缓解小鼠肺水肿症状且具有抗炎效果。此外,通过蛋白免疫印迹试验和PLY蛋白寡聚化抑制试验证明鼠尾草酸通过直接抑制PLY的寡聚化作用来抑制其成孔活性,并且鼠尾草酸不影响肺炎链球菌自身溶血素的正常表达。[结论]综上,鼠尾草酸通过直接抑制PLY寡聚化作用而抑制其生物学活性,从而对肺炎链球菌感染小鼠提供全面的保护作用,该结论为以PLY为靶标进行肺炎链球菌抗毒力药物筛选奠定基础。